小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验.pptxVIP

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验;原 理（体外法）;材 料;方 法;（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。;（3）吞噬细胞与菌混合培养 取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃温育30min。 取1滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数。;第8页/共18页;高倍镜下观察计算： 吞噬率％=(吞噬白色念珠菌的巨噬细胞数/100个巨噬 细胞)×100％ 吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬白色念珠菌总数 /100个巨噬细胞 **(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞);注 意 事 项;;3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞数就相应的少一点。 ;血球计数板计数法;第14页/共18页;第15页/共18页;第16页/共18页; 首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从盖片端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入，静置数分钟后，再放在微镜下观察计数。 计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。计数应重复3次，取其平均值。;感谢您的欣赏