流式细胞仪FlowCytometer基础简介.pptxVIP

流式细胞仪FlowCytometer基础简介第1页/共26页 流式细胞仪（Flow Cytometer)基础简介第2页/共26页 主要内容流式细胞仪概要流式细胞仪的工作原理流式细胞仪测量的对象第3页/共26页 什么是流式细胞仪●流式细胞仪实物BD FACSVantageBD-Calibur 第4页/共26页 流式细胞仪基本结构第5页/共26页 ●FCM的定义 流式细胞仪是指，使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。第6页/共26页 对比 流式细胞仪是一种特殊的显微镜 流式细胞仪 显微镜 流动的细胞 静止的细胞样本 数量大 数量少 高速分选 样本难以再利用细胞群体特征量分布 可以揭示细胞内部结构信息第7页/共26页 流式细胞仪 蛋白胶 多参数 单参数 量化的分布 平均值 容易检测各个参数间的相关性 不容易第8页/共26页 功能特点 （1）多参数定量分析每一个细胞； 　　（2）细胞分选； 高纯度：99%以上； 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群； 单细胞克隆等。 　（3）高通量（分析分选）． 　分析150，000个/ 秒 　分选100，000个/秒 第9页/共26页 应用领域 疾病诊断生物学基础研究环境监测海洋微生物研究农业领域应用等等 70年代美国为攻克癌症而建造。厂商：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation 已成为一个几十亿美金的产业第10页/共26页 流式细胞仪工作原理流体动力学聚焦流动室激光聚焦液流与光源第11页/共26页 探测光路聚焦第12页/共26页 二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光 光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。光信号收集第13页/共26页 数据处理FSC SSC FL1 FL2 FL3对数 线性 线性 线性 对数脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）第14页/共26页 流式细胞仪产生的信号非荧光信号颗粒度细胞大小第15页/共26页 散射光信号区分裂解后的外周血细胞群第16页/共26页 荧光信号 荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量第17页/共26页 PI＋Annexin－V细胞凋亡检测DNA含量-PIAnnexin-V第18页/共26页 CD45 FITC (log)R1=单核细胞 (CD14+ve) R2=淋巴细胞 (CD45单核细胞)R3=中性粒细胞 (CD45单核细胞) CD14 PE (log)前向散射光 (linear)侧向散射光(linear)PE＋FITC荧光标记检测外周血裂解后细胞群第19页/共26页 细胞分选第20页/共26页 流式细胞仪的测量对象大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒。 大小范围：0.2uM-300uM。对象类型 细胞类型： （1） 高等真核细胞； （2）酵母； （3）细菌； （4）多细胞的聚集体，如胰岛等。 非生命颗粒： 细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。第21页/共26页 流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例 1）不需染色： 大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。 2）需染色或标记： 细胞组分