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RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;miRNA途径： miRNA可以降解mRNA，或者抑制mRNA翻译蛋白质;RNAi作用机制;RNAi实验 三大基本路线;RNAi 技术原理;（1）构建目的基因载体，选取目的基因的特异性序列（约200bp~300bp），构建到T载体上。 ?（2）使用5′端连接有T7启动子的引物PCR扩增目的基因，得到两端均连接有T7启动子 序列的目的基因片段。 （3）T7RNA聚合酶进行转录。dsRNA、ssRNA、DNA模板。 （4）加入Rnase 和Dnase消除ssRNA和DNA模板。 （5）离心纯化dsRNA。 ;RNAi 技术原理 ppt课件;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理; 此法需首先化学合成一段编码siRNA 正义和反义链的模板，正义与反义序列之间由一段环(1oop)序列隔开。插入载体Pol Ⅲ启动子下游，然后转入细胞，环序列可使转录出的RNA链折叠成具发夹结构的小RNA分子（shRNA） ，这些小RNA可被细胞内的Dicer切割为长21bp的siRNA。;RNAi 技术原理 ppt课件; RNAi作为一种重要的基因转录后沉默机制，广泛应用于基因功能研究，肿瘤及病毒感染性疾病治疗的实验研究，其核心内容是siRNA能够抑制同源基因的表达。对于siRNA 而言，现在颇有争议的地方在于它对靶基因的沉默特异性，主要体现在两个方面： （1）脱靶效应。 （2）打破内源性miRNA的平衡。;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;miRNA途径： miRNA可以降解mRNA，或者抑制mRNA翻译蛋白质;RNAi作用机制;RNAi实验 三大基本路线;RNAi 技术原理;（1）构建目的基因载体，选取目的基因的特异性序列（约200bp~300bp），构建到T载体上。 ?（2）使用5′端连接有T7启动子的引物PCR扩增目的基因，得到两端均连接有T7启动子 序列的目的基因片段。 （3）T7RNA聚合酶进行转录。dsRNA、ssRNA、DNA模板。 （4）加入Rnase 和Dnase消除ssRNA和DNA模板。 （5）离心纯化dsRNA。 ;RNAi 技术原理 ppt课件;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理; 此法需首先化学合成一段编码siRNA 正义和反义链的模板，正义与反义序列之间由一段环(1oop)序列隔开。插入载体Pol Ⅲ启动子下游，然后转入细胞，环序列可使转录出的RNA链折叠成具发夹结构的小RNA分子（shRNA） ，这些小RNA可被细胞内的Dicer切割为长21bp的siRNA。;RNAi 技术原理 ppt课件; RNAi作为一种重要的基因转录后沉默机制，广泛应用于基因功能研究，肿瘤及病毒感染性疾病治疗的实验研究，其核心内容是siRNA能够抑制同源基因的表达。对于siRNA 而言，现在颇有争议的地方在于它对靶基因的沉默特异性，主要体现在两个方面： （1）脱靶效应。 （2）打破内源性miRNA的平衡。;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理