单克隆抗体制备.pptxVIP

实验研究的目的性 — 功能、形态、数量实验设计的科学性 — 全面、动态、鲜明、对应、对照实验方法的合理性 — 确切、先进实验原理的内涵性 — 意义、要点实验操作的规范性 — 准备、严格、准确、重复第1页，共30页。免疫血清和单克隆抗体的制备第2页，共30页。一、免疫血清的制备1. 原理： 机体具有多种B细胞克隆，将适当的抗原物质注入人或动物体内后可被不同的B细胞克隆同时识别，经过一定时间，受刺激的B细胞克隆针对抗原表位的多少而产生相应的特异性抗体，每一抗原表位都能诱发相应B细胞克隆产生单克隆抗体，此获得的血清即为含多种单克隆抗体的混合物，称之为多克隆抗体免疫血清，简称免疫血清。 优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及动物的免疫应答能力。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔和有无佐剂等因素。第3页，共30页。免疫原1.抗原种类 微生物抗原、组织抗原和免疫球蛋白抗原。2. 抗原纯度 一般的抗原只要达到亲合层析或SDS－PAGE电 泳纯即可。3. 抗原用量 在一定范围内与免疫应答强度呈正相关。在应 用完全弗氏佐剂时，蛋白质类抗原剂量以0.5～ 1mg/kg体重为宜，加强免疫约为基础剂量的 1/2～1/3。第4页，共30页。4. 抗原的处理1）颗粒性抗原：红细胞、菌体等制成悬液，不需佐 剂，直接免疫。菌体数1×1010个/ml 为宜。2）可溶性蛋白质抗原