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本发明公开了一种精确定量检测自噬流的方法,步骤如下:(1)构建EGFP/LC3HIBIT共表达载体,EGFP和LC3HIBIT分别用于独立的启动子,互不影响;(2)通过瞬转或筛选单克隆的方法,获得EGFP和LC3‑HIBIT蛋白的共同表达的细胞;(3)筛选单克隆稳转细胞后,可在此细胞的基础上进行与自噬相关的各种遗传操作,及筛选自噬相关药物等;(4)在多功能酶标仪上设置程序分别测定发光和荧光读值,以EGFP为该实验中的内参,校准因细胞差异导致的HIBIT读值,从而准确反映细胞的自噬程度。
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 112322661 A
(43)申请公布日 2021.02.05
(21)申请号 202011228259.3
(22)申请日 2020.11.06
(71)申请人 深圳大学
地址 51
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