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- 2023-06-05 发布于湖北
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猪巨细胞病毒快速检测方法的建立及
猪巨细胞病毒(PRRSV)是一种猪源病毒,可导致高热、呼吸道症状、泌尿生殖系统疾病和流产等症状,对养猪业产生了严重的经济损失。传统的PRRSV检测方法包括病毒分离、PCR等技术,但这些方法需要长时间的样本前处理和实验操作,且对设备和技术的要求较高。因此,研究一种快速、敏感、准确的PRRSV检测方法对疾病的预防和控制具有重要意义。
本研究旨在建立一种基于金纳米粒子标记的LFA(lateral flow assay)快速检测PRRSV的方法。具体方法如下:
1.选择PRRSV N抗原作为检测靶点,通过重组蛋白表达和纯化获得N蛋白。
2.制备金纳米粒子和检测试纸片,将金纳米粒子稳定性调节至最佳状态。
3.对金纳米粒子进行特异性共价偶联化学修饰,制备金标记的N蛋白探针。
4.将金标记的N蛋白探针与检测试纸片上的抗PRRSV N单克隆抗体预包被区相结合,制备LFA病原检测试纸片。
5.将10 μL的猪血清或鼻拭子样本,加入30 μL的检测缓冲液(PBS),进行快速检测。
6.检测结果通过检测线和控制线之间的颜色变化进行判断,即出现紫色检测线表示呈阳性,只有控制线出现则为阴性。
本方法检测PRRSV的灵敏度高,能够检测到1.25 × 10^2 TCID50 / mL以下的病毒。同时,该方法的特异性也得到了验证,并未出现对PRRSV同属或其他病原微生物的交叉反应
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