实验动物组织核酸提取与鉴定.pptxVIP

实验动物组织核酸提取与鉴定;动物组织中DNA的提取与鉴定;实验目的;实验原理—DNA提取;氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可使DNA析出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层；异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。而DNA不溶于乙醇等有机溶剂，因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA。 ;实验原理—DNA鉴定; 含有0.14 mol/L NaCl的0.015 mol/L柠檬酸钠溶液 1mol/L NaCl溶液 氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V） 95%乙醇 氨水溶液 5% AgNO3溶液;;实验仪器;（一）DNA的提取 取新鲜猪肝组织3 g，加入0.14 mol/L NaCl，0.015 mol/L柠檬酸纳溶液6 mL，在乳钵中加入少量石英砂仔细研磨成匀浆，或用组织匀浆器匀浆30 s； 将匀浆倒入离心管，4000 rpm，15 min，弃上清； 沉淀中加入15 mL 1mol/L NaCl，混匀，搅拌数分钟， 4000 rpm，15 min，弃沉淀； 上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V），剧烈振摇10 min， 4000 rpm，10 min； 取上层，转移至另一离心