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实验12质粒DNA的提取第1页/共21页第2页/共21页实验七 质粒DNA的提取 (碱法)第3页/共21页 实验目的 实验原理 实验仪器、材料与试剂 实验步骤 实验结果及讨论 第4页/共21页实验目的了解碱法提取质粒的原理；掌握碱法提取质粒的方法。第5页/共21页实验原理质粒是一种细菌染色体外的、具有自主复制能力的、共价闭合环状超螺旋结构的小型DNA分子。碱裂解法提取质粒是实验室常用的方法。这种方法是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。第6页/共21页结构的三大要素： 多克隆位点 选择标记（耐药性，LacZ） 独立的复制单位种类： 质粒 噬菌体 酵母人工染色体（YAC） 反转录病毒载体 表达载体等第7页/共21页第8页/共21页在碱性条件（pH 12.5）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一起。当加入乙酸钾恢复至中性时，染色体DNA之间交联形成不溶性结构，而质粒DNA分子很快复性，离心时染色体DNA与细胞碎片一起被沉淀出来，而质粒DNA则留在上清液中。用异丙醇或乙醇沉淀后洗涤，可得到较纯的质粒DNA。第9页/共21页实验仪器、材料与试剂 （一） 仪器 1. 恒温摇床 2. 超净工作台 3. 高压灭菌锅 4. 高速台式离心机 5. 微量取液器 第10页/共21页（二）