DB22T 414-2005高效液相色谱法测定六种水溶性维生素.docx

DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB22/T 414-2005 高效液相色谱法测定六种水溶性维生素 Determination for six sorts of vitamin by HPLC 2005-11-01发布 2005-12-01实施 吉 林 省 技 术 监 督 局 发布 前 言 本标准由吉林省卫生厅提出 本标准由吉林省技术质量监督局批准 本标准起草单位：吉林省卫生监测检验中心 本标准主要起草人 杨明远 战英 丁政 段世敏 本标准于2005年11月首次发布。 高效液相色谱法测定六种水溶性维生素 1. 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定水溶性维生素的原理，试剂，仪器设备，分析步 骤，结果。 本标准适用于高效液相色谱法测定维生素 B? 、维生素 B2、 维生素 B6、烟酸(维生素 Bs)、 烟酰胺 (Vpp) 维生素C。 2. 原理 样品中的水溶性维生素经溶解、稀释、过滤，使用具有紫外检测器的高效液相色谱 仪测定，根据色谱峰的保留时间定性，峰面积或峰高定量， 3. 试剂 实验用水为去离子 3.1甲醇(色谱纯) 3.2甲酸(分析纯) 3.3甲酸铵(分析纯) 3.4高效液相色谱流动相： 0.1000mol/L甲酸铵— 甲酸 (PH4~5)+ 甲醇(75+25) 3.5维生素B? 、维生素 B2、维生素 B6、烟酸(维生素Bs)、烟酰胺 (Vpp) 维生素C 标准品。 4. 仪器设备 4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器 (UV) 4.2超声波发生器 4.3酸度计 4.4磁力搅拌器 4.5离心机 5. 分析步骤 5.1准确称取样品1.0g 左右加1 mL0.0001mol/L盐酸溶解，用水定容至25mL。 超声波提取 5min, 离心取上清液过0.45um 滤膜后分析. 5.2测定 5.2.1液相色谱参考条件 5.2.1.1紫外检测器检测波长254 nm: 5.2.1.2色谱柱：: PC8—10/S25.4(250mm×4.0mm, 粒径5um) 5.2.1.3柱温30℃ 5.2.1.4流速1.0mL/min 5.2.2色谱分析 取10uL 标准溶液及样品提取液进高效液相色谱仪，以保留时间定性，吸收峰高或峰面 积与标准比较定量。 5.2.3色谱图：见图1 6计算结果 6.1计算按下式： h/hs×C×25 X= m 式中： X 一样品中维生素的含量， mg/g: h—样品的吸收峰高或峰面积； hs- 标准的吸收峰高或峰面积； c—维生素标准溶液的浓度， mg/ml; m— 样品质量，g; 6. 精密度和准确度 对本方法进行精密度和准确度实验，方法加标回收率在97.4%~102.8%,相对标准偏差≤ 4.5%。 图 1