实验薄层板的制备及活化.pptx

实验薄层板的制备及活化 第1页/共30页 2 天然产物化学 生物技术及应用专业 第2页/共30页 3 实验 三 薄层板的制备及活化 ——硅胶板 第3页/共30页 4 薄层色谱简介 薄层色谱中的吸附剂是铺在玻璃、塑料或金属片或薄板上的较薄的、均匀的一层细粉状物质，因支持剂的种类、制备方法和选用溶剂的不同，可按吸附、分配或二者结合的方式达到分离化合物的目的。 TLC中涂布的物质如硅胶、氧化铝、聚酰胺等。硅胶是最常用的薄层色谱吸附剂。 第4页/共30页 5 可以通过比较斑点的Rf值，或将未知样品与对照品在同一板上展开至同样高度，对样品进行初步的鉴定。 还可通过比较可见斑点的大小进行半定量的判断。 还可以通过光密度测量法实现定量测定。 第5页/共30页 6 一、目的要求 1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法； 2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法； 3．会应用薄层层析法检测识中草药化学成分。 第6页/共30页 7 二、薄层板的制备 1．不加粘合剂的薄层涂布法 （1）氧化铝薄层 （2）纤维素薄层 （3）聚酰胺薄层 2．加粘合剂薄层的涂布法 （1）硅胶G薄层 （2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层 第7页/共30页 8 （1）氧化铝薄层 将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度，向前推动，即得均匀薄层。 本实验主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为0.3~1mm的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一定距离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化铝粉均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。 第8页/共30页 9 （2）纤维素薄层 一般取纤维素粉1份加水约5份，在烧杯中混合均匀后，倒在玻璃板上，轻轻振动，使涂布均匀，水平放置，待水分蒸发至近干，于100±2℃干燥30~60分钟即得。 第9页/共30页 10 （3）聚酰胺薄层 取锦纶丝经一系列加工使其完全溶解成透明胶状溶液。 将此溶液适量倒在水平放置的洗净的玻璃片上，并自然向周围推匀，厚度约0.3mm,薄层太厚时，干后会裂开。 完全固化后变不透明白色，再放数小时后，泡在流水中洗去甲酸，先在空气中晾干，后在烘箱中0℃恒温加热活化15分钟，冷后置干燥器中贮存备用。 第10页/共30页 11 （1）硅胶G薄层 取硅胶G或硅胶GF一份，置烧杯中加水约3份混合均匀（加水量根据实际情况自行调整），放置片刻； 随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布），均匀涂布成0.25~0.5mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀； 第11页/共30页 12 在水平位置放置，待薄层发白近干，于烘箱中105℃活化0.5~1小时，冷后贮于干燥器内备用。 活化温度和时间可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。 第12页/共30页 13 物质之所以能在吸附剂（以硅胶、氧化铝或正相键合硅胶为例）的薄层上分离，是因为吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，被吸附物质（极性或可极化的物质）的量及被吸附的牢固程度在其它条件一定的条件下取决于活性点的强度（单位面积的表面能量）及数目（单位质量的表面积）， 单位质量吸附剂所含活性点的数目越多、活性点的强度越大，则吸附剂的活度越高，即，对物质（极性或可极化的物质）的吸附能力越强，被吸附物质的Rf值就越小。 第13页/共30页 14 当此类吸附剂的含水量增加时，吸附剂的活性点被水中羟基占据的数目增多，因此，自由活性点减少，吸附剂的活度变小，吸附力也变小，于是被吸附物质的Rf就变大。 因此, 为了使薄层板的水分含量相对一致, 使用对薄板进行活化可以使Rf值具有较好的重现性。 第14页/共30页 15 （2）硅胶(H) CMC-Na薄层 取羧甲基纤维素（CMC-Na） 0.2g，溶于25ml水中，在水浴上加热搅拌使完全溶解，倒入烧杯中，加薄层层析用硅胶（颗粒度10~40μm的约6~8g）。 混成均匀的稀糊，按照硅胶G薄层涂布法制备薄层;（轻摇均匀涂布） 第15页/共30页 16 或取0.8%羧甲基纤维纳10ml，倒入广口瓶（高约10~12cm）中，然后逐步加入薄层层析用硅胶3.3克，不断振摇成均匀的稀糊； 把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅胶糊接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片，将未粘附硅胶糊的那一面水平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干，100℃下烘30分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。 第16页/共30页 17 三、仪器和试剂 玻璃板（5×10cm 或 2.5×7.5cm，洁净且干燥）