蛋白质的相互作用研究方法.pptxVIP

蛋白质的相互作用研究方法第1页/共37页 蛋白质－蛋白质相互作用和识别在诸如生物催化、物质转运、信号传导、免疫、细胞调控等多种生命过程起着重要的作用。第2页/共37页 第三节 蛋白质的相互作用的研究方法免疫共沉淀Co-immunoprecipitation (Co-IP)GST pull-down assay荧光共振能量转移Fluorescent Resonant Energy Transfer （FRET）双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescent Complement）BIFC酵母双杂交系统Yeast Two-Hybrid Systerm其它方法第3页/共37页 1. 原理 当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合，也可用于确定一种特定蛋白质的新的结合蛋白。优点：生理条件下的结合缺点：可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用一、免疫共沉淀第4页/共37页 2.方法1) 收获培养的细胞（1×107－1×108）冷PBS洗涤2次2）细胞裂解液裂解细胞，冰浴30min3) 12000rpm 离心 30min4）收集上清并加入适量抗体，4oC摇动1h～过夜