生物填料内细菌总数的测定平皿计数法.docxVIP

PAGE 2 生物填料内细菌总数的测定平皿计数法 1方法概要 将生物填料从集水池取出，并将填料内的细菌全部洗脱下来，研磨均质、超声分散。测定细菌总数，计算单位体积生物填料内的细菌总数。 2试剂和材料 2.1无菌稀释水：将生理盐水用蒸汽压力灭菌锅于（121±1）℃灭菌15min～30min。 2.2氢氧化钠溶液：40g/L，分析纯。 2.3乙醇溶液：75%。 2.4培养基：LB培养基。 2.5玻璃培养皿或一次性灭菌塑料培养皿：直径90mm。 2.610脱脂棉签：医用，无菌。 10 3仪器 3.1无菌室或超净工作台 3.2蒸汽压力灭菌锅：有效容积50L，50℃～126℃，控温精度1℃。 3.3电热干燥箱：60℃～280℃，控温精度2℃。 3.4漩涡混匀器：0rpm～3000rpm，硅胶头。 3.5超声波清洗器：功率500W，频率50kHz。 3.6玻璃组织研磨器：有效容积20mL。 3.7生化培养箱：0℃～50℃，控温精度1℃。 3.8刻度吸管：1mL。 3.9试管：直径20mm，长度200mm。 3.10采样瓶：500mL，玻璃材质。 3.11锥形瓶：500mL，玻璃材质。 4测定步骤 4.1无菌处理 4.1.1将采样瓶、玻璃培养皿、移液枪枪头、组织均质器等做湿法或干法灭菌。 4.1.2制备无菌的稀释水和培养基。 4.2生物膜采样、洗脱、研磨、分散 4.2.1测量生物填料的体积，