NY_T 3655-2020CN 饲料中N-羟甲基蛋氨酸钙的测定.docx

ICS 65.120 B 46 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 3655—2020 饲料中N- 羟甲基蛋氨酸钙的测定 Determination of N-Hydroxymethyl methionine calcium in feeds 2020-07-27 发布 2020-11-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 3655—2020 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC 76)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 (北京)]。 本标准主要起草人：索德成、赵小阳、贾铮、赵根龙、杨希国。 1 NY/T 3655—2020 饲料中 N-羟甲基蛋氨酸钙的测定 1 范围 本标准规定了测定反刍动物饲料中N-羟甲基蛋氨酸钙的高效液相色谱法和氨基酸分析仪法。 本标准适用于牛、羊精料补充料和预混合饲料中 N-羟甲基蛋氨酸钙的测定，不适用于加有蛋氨酸或 蛋氨酸盐的产品。 木标准定量限为20.0 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件.其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18246—2000 饲料中氨基酸的测定 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 高效液相色谱法 3.1 原理 用盐酸溶液将N-羟甲基蛋氨酸钙水解成蛋氨酸，水解液经固相萃取柱净化，进行柱前衍生后用高效 液相色谱法进行测定，外标法定量。 3.2 试剂或材料 除方法另有规定外，试剂均为分析纯。 3.2.1 水 ：GB/T 6682,一级。 3.2.2 甲醇：色谱纯。 3.2.3 乙腈：色谱纯。 3.2.4 2,4-二硝基氯苯溶液(30 g/L): 称取二硝基氯苯0.30 g, 加乙腈溶解并定容至10 mL 。 临用前 配置。 注：二硝基氯苯具有毒性，为皮肤致敏物。避免皮肤直接接触，如有接触，用酒精擦拭。用流动清水冲洗。 3.2.5 盐酸溶液(0.1 mol/L): 取8.3 mL 盐酸于1000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。 3.2.6 碳酸盐缓冲液(1.0 mol/L,pH=9.0): 称取无水碳酸钠53 g 及碳酸氢钠42 g 溶于水中稀释至 1000mL, 用 1mol/LNaOH 溶液调节至 pH 9.0。 3.2.7 乙酸钠溶液：称取1.25g 无水乙酸钠，用水溶解后定容至1000mL, 混匀，用0.45 μm 滤膜过滤。 3.2.8 N- 羟甲基蛋氨酸钙标准储备溶液(1000μg/mL): 准确称取N- 羟甲基蛋氨酸钙对照品(纯度≥ 95%)0.1g (精确至0.0001g), 用盐酸溶液(3.2.5)配制成浓度为1000μg/mL 的标准储备液。2℃~ 8℃下避光保存备用，有效期为6个月。 3.2.9 N-羟甲基蛋氨酸钙标准工作溶液：根据需要，用水稀释标准储备溶液，配制成浓度为2μg/mL、 5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的标准工作溶液。临用现配。 3.2.10 固相萃取柱：C? 固相萃取柱(60 mg/3mL), 或性能相当者。 3.2.11 水相滤膜：0.45μm。 3.3 仪器设备 3.3.1 超声波提取器。 2 NY/T 3655—2020 3.3.2 电子天平：感量0.0001g、感量0.001 g。 3.3.3 离心机：转速不低于5000 r/min。 3.3.4 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。 3.3.5 涡旋混合仪。 3.3.6 恒温水浴：可控温度达80℃。 3.4 样品 按照GB/T 20195 制备样品，全部通过0.28mm 孔筛，混匀，装入密闭容器中，备用。 3.5 试验步骤 3.5.1 试样提取 平行做2份实验。准确称取2g (精确到0.001 g),置于50mL 离心管中，准确加入盐酸溶液(3.2.5) 20mL, 涡旋30 s, 超声提取30 min, 然后于离心机上5000 r/min 离心5 min, 取上清液备用。 3.5.2 净化 固相萃取柱依次用3mL 甲醇、3 mL 水活