DB64 1253_2016  橡胶草种苗组培快繁技术规程.docx

ICS 65.020.20 B 05 备案号： 宁 夏 DB64 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/ T1253—2016 橡胶草种苗组培快繁技术规程 2016- 12-28发布 2 0 1 7 - 0 3 - 2 8 实 施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 I DB64/ T1253—2016 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准起草单位：宁夏农林科学院农业生物技术研究中心。 本标准主要起草人：张源沛、朱金霞、郑国保、李苗、孔德杰。 1 DB64/ T1253—2016 橡胶草种苗组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了橡胶草种苗组培快繁的材料的采集、丛芽诱导、增殖培养、生根培养、穴盘苗生产及 管理、穴盘苗质量标准、包装、标志及运输等技术要素。 本标准适用于橡胶草种苗的组培快繁技术管理的全过程。 2 材料的采集 2.1 新品种母本圃种植 将引进的新品种种株种植在温室内，加强肥水管理，确保植株健壮，防治病虫害，减少植株表面附 带的微生物和害虫。 2.2 母株的选择 选择无病虫害，生长健壮的橡胶草植株为母株。 2.3 实验材料的采集 2.3.1 采集时间 在5月～11月，选择连续晴天3天以上的天气采集外植体。 2.3.2 采集方法 a) 选取母株上健壮的叶片和叶柄及根做实验材料； b) 取生长30d 左右的橡胶草整株，从叶片基部切取长度5 cm～7cm 鲜嫩的叶片，待用；剪下主 根，除去须根，待用。 2.4 外植体的消毒 外植体消毒按以下步骤进行： 先用自来水冲洗20 min～30 min。再用洗洁精或洗衣粉水浸泡并放于振荡器中振荡清洗30 min, 然 后用去离子水冲洗5 次。然后在超净工作台中，用75%酒精将外植体消毒30 s, 无菌水漂洗1 次～2次。 之后0.1%升汞+4 滴～5 滴吐温-20的消毒液浸没外植体，轻轻摇动，消毒9 min～11min, 后用无菌水 漂洗4 次～5 次，每次1min～2min。 最后将叶片、叶柄和根分别切段，叶片约为0.5 cm×0.5 cm大小， 叶柄长约1.0 cm～1.5 cm, 根段长约1.0 cm～1.5 cm, 备用。 3 丛芽诱导 3.1 丛芽诱导培养基配方 橡胶草叶片和叶柄丛生芽诱导培养基参见附录 A (表 A.1), 根 丛生芽诱导培养基参见附录 A (表 2 DB64/ T1253—2016 A.2)。 3.2 培养基制作方法 3.2.1 准备 根据培养基成分准备好去离子水、琼脂、蔗糖和各类母液等。 3.2.2 定容 在1L的容器中，按照附录A中要求分别加入MS培养基、琼脂、蔗糖，再根据要求加入激素，然后加 入700 mL～800 mL去离子水，并边加热边搅拌至均匀，加去离子水至1 L。 3.2.3 pH 值测定 充分搅拌后，用pH 试纸测pH 值，用0.1 mol/L的HC1或0.1 mol/L的NaOH调节pH值至5.8。 3.2.4 分装 将培养基分装在350 mL的培养瓶中，每升分装20 瓶～25瓶，每瓶分装约40 mL～50 mL。 3.2.5 封口 盖好带透气膜的瓶盖。 3.2.6 灭菌 在1.1 kg/cm2~1.2 kg/cm2下，121 ℃灭菌15 min。 3.2.7 贮存 灭菌后的培养基宜在室温下放置5 天左右再用，且贮存时间不应超过一个月。 3.3 培养条件 丛芽诱导培养的温度控制在20 ℃~28 ℃,光照强度为15001x～30001x, 光照时间11 h/d～17 h/d。 3.4 接种与转接 3.4.1 接种 将3.4中准备好的实验材料叶片、叶柄和根做为外植体，分别接种到叶片和叶柄丛生芽诱导培养基、 根丛生芽诱导培养基上，诱导丛芽生长。 3.4.2 转接 首次接种5 d～8 d后应将外植体转接至新的丛生芽诱导培养基，其后则每隔20 d～30 d转接1 次。 4 增殖培养 4.1 增殖培养基 橡胶草的增殖培养基参见附录A (表A.1或表A.2)。 培养基按3.2中方法进行制作。 3 DB64/ T1253—2016 4.2 培养条件 增殖培养的温度、光照强度及光照时间与丛芽诱导相同。 4.3 培养周期 橡胶草的增殖周期为20 d～30 d, 及时将培养材料转接至新鲜的增殖培养基。 4.4 增殖转接 4.4.1 转接方法 转接增殖丛芽时，应将大丛芽切分为3个～4 个芽组成的小芽丛。切分丛芽时，应避免产生过多和 过大的伤口。 4.4.2 注意事项 废弃污染、白化、玻璃化的增殖苗。 4.5 材料