普通植物病理学课件-植物病毒.pptVIP

2．植物病毒粒体的稳定性 对汁液传播的病毒，可通过病株汁液的体外性状（钝化温度、稀释限点和体外存活期）来测定； 这些性状虽易受各种因素影响，但仍可作为区别不同病毒的依据之一，而且对混合侵染病毒的分离及制定病毒提纯方案具有参考价值。 ⑴ 钝化温度（Thermal inactivation point，TIP） 病毒在病株粗汁液中，经恒温水浴处理10分钟即丧失侵染力的最低温度。 TIP最低的病毒是番茄斑萎病毒，只有45℃； 最高的是烟草花叶病毒，为93℃； 而大多数植物病毒为55～70℃。 一种病毒的不同株系可以有不同的钝化温度，所是鉴定病毒的一项有用的指标。 ⑵ 稀释限点（Dilution end point，DEＰ） 病毒在病株粗汁液中，经若干倍数的稀释后仍能保持其侵染力的最大稀释倍数. 用10-1，10-2，10-3……表示。 一般的植物病毒DEP为10-2～10-３。 稀释限点与汁液中病毒粒子的浓度有关，浓度愈高，稀释限点也愈大。而病毒的浓度往往受栽培条件、寄主植物状况所影响。因此报道中同一病毒的稀释限点不一定是相同的，只能作为鉴定病毒的参考指标。 ⑶ 体外存活期（Longevity in vitro，LIV） 病毒在病株粗汁液中，置于20～22℃室温下，能够保持侵染力的最长时间。 大多数病毒的LIV在数天到数月。 由于在不同植物汁液中存在不同的酶或抑制物，从而使病毒的体外存活期也可能有较大的差异，所以这项指标也只能在鉴定病毒时参考。 （二）电镜观察 病毒粒体十分微小，只有在电子显微镜下才能观察到。 电镜观察时，病毒样品须经过负染处理，使病毒粒体表面附着一层重金属离子，置于特殊的载网和支持膜上，放入电镜真空样品室中进行观察。 （三）血清学检测 抗原（antigens）：一切能在动物体内诱导产生抗体的物质，都叫抗原。蛋白、蛋白降解物、多糖等。 抗体（antibody）:是动物抵抗外来的抗原而产生的一种物质。 抗原抗体的结合过程叫血清学反应。 抗血清（antiserum）:含有抗体的血清。 利用植物病毒外壳蛋白的抗原特性，制备特异性的抗血清。利用抗原抗体特异性结合可以鉴定病毒。 抗血清的制备： 纯化病毒， 注射小动物（兔子、小白鼠等）， 取血获得抗血清。 琼脂双扩散法： 酶联免疫吸附法（Enzyme Lnked Immuno Sorbent Assay,ELISA）： (四)分子生物学检测 1 聚合酶链式反应（PCR）: 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是二十世纪八十年代发展起来的一种DNA特定片段体外扩增技术，已被广泛地应用于植物病毒检测。 其优点是快速、灵敏、特异性强。 二、病毒在植物体内的运转 在植物叶肉细胞间的移动称为胞间运转； 经维管束输导组织的运转称为长距离运转。 （一）胞间运转 已知植物病毒的胞间运转有多种途径，而以经胞间连丝的运转最为普遍。 该过程需有病毒的运动蛋白参与。 首先运动蛋白作用于胞间连丝，使胞间连丝的孔径增大几倍至几十倍；同时运动蛋白与病毒核酸结合，使核酸呈细长的线状；最后病毒是以核酸的形式通过扩展了的胞间连丝进入相邻的细胞。 一些病毒仅能在某些寄主的接种点附近有限的细胞内扩散，表现为局部侵染。 一些病毒为韧皮部限制病毒（phloem-limited virus），即病毒经介体传入寄主韧皮部后，仅能在韧皮部增殖和运转。 病毒在细胞间移动的速度是缓慢的，平均每天不过1mm左右。 （二）长距离运转 植物病毒的侵染大都是系统性的； 先在薄壁细胞组织中增殖和运转； 然后进入维管束组织的韧皮部或木质部很快地运转。 （三）病毒在植物体内的分布 全株性侵染的病毒并不是植株的每个部分都有病毒，如只有部分病毒可以进入植株的种胚，所以病毒可以由种子传染的还是少数。 有少数病毒可以进入花粉，花粉就可以传染这些病毒。 植物旺盛生长的分生组织很少含有病毒，如茎尖、根尖。因此切下茎端小段（0.1-0.25cm）分生组织培养，可以得到无病毒的植株。