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本申请属于生物工程技术领域，具体涉及一种不依赖PCR反应的短片段快速克隆方法。该方法包括：线性化载体、设计并合成两条部分互补的长链寡核苷酸序列、制备目的序列、同源重组、转化、筛选，获得重组载体等步骤。本申请中，发明人对现有重组反应中目的片段的制备方法进行了进一步改进，利用单链重组方式延长了插入序列的长度，并利用大肠杆菌的天然修复系统完成了双链补全，从而达到短片段快速克隆目的。该发明保留了现有重组方法简单快捷的技术特点，同时兼具了现有连接方法在连接长度方面的技术优势。可为重组质粒改造（例如酶切位点
(19)国家知识产权局
(12)发明专利
(10)授权公告号 CN 113215145 B
(45)授权公告日 2022.07.08
(21)申请号 202110499606.4 CN 110499310 A,2019.11.26
(22)
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