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本发明公开了稳定表达Cas9蛋白的LLC‑PK1细胞系及其构建方法,所述LLC‑PK1细胞是猪近端肾小管上皮细胞LLC‑PK1为宿主细胞,转染含Cas9的慢病毒表达载体,经过5μg/mL的嘌呤霉素筛选得到的能够稳定表达Cas9蛋白的转化体,构建方法包括以下步骤:步骤一,pLentiCRISPRv2‑Blast无内毒素质粒制备;步骤二,慢病毒包装;步骤三,细胞转染;步骤四,多细胞克隆筛选;步骤五,单细胞克隆筛选;本发明所筛选出的LLC‑PK1‑Cas9过表达阳性多克隆细胞株包含完整的Cas9基因序
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 113234684 A
(43)申请公布日 2021.08.10
(21)申请号 202110504164.8 C12N 9/22 (2006.01)
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