分子荧光光谱法320案例.pptxVIP

分子荧光光谱法320案例第1页/共86页第2页/共86页8.1 概论1575年西班牙内科医生和植物学家N.Monardes，提到贮存在由菲律宾紫檀木“Lignum Nephriticum”制成的杯中的水，呈现了极为可爱的天蓝色。First observed from quinine by Sir John Frederick William Herschel in 1845, blue fluorescence @450nm.Yellow glass of wineEm filter 400nmBlue glass Filter 400nmQuinine Solution第3页/共86页 1852年，Stokes在用分光光度计考察奎宁和叶绿素的荧光时，观察到其荧光波长比入射光波长稍长些，判断这种现象是物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，从而导入了荧光是光发射的概念，他还由发荧光的矿石“萤石” 而提出“荧光”这一术语。George Gabriel Stokes （1819-1903）第4页/共86页 1858 E. Becquerel 第一次发现磷光。 1867年，Goppelsroder进行了荧光的首次应用分析，应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定。 19世纪以前，荧光的观察是靠肉眼进行的，直到1928年，才由Jette和West设计了第一台荧光计。第5页/共86页Fluorophore SamplesMany materials emits fluorescenceLiquids, solids, gasOrganic compoundsaromatic hydrocarbons(anthracene, perylene,naphthalene…), fluorescein,rhodamines, aminoacids(tryptophan, tyrosine…), etc.Inorganic compoundslanthanide ions (Eu3+, Tb3+), doped glasses (e.g. with Nd, Mn, Ce , Sn, Cu, Ag), crystals (ZnS, CdS, ZnSe, GaS…), etc.Organometallic compounds第6页/共86页荧光灯管-电激发发光3-Br-Carbazole 磷光荧光棒-化学反应发光水母-生物发光第7页/共86页 分子发光瞬时荧光迟滞荧光荧光分子发光磷光 荧光8.1.1 分子发光的类型光致发光Photoluminescence 化学发光/生物发光热致发光场致发光摩擦发光按激发的模式分类：按分子激发态的类型分类：斯托克斯荧光(Stokes)：λexλem反斯托克斯荧光 (Antistokes) λexλem共振荧光(Resonance)：λex=λem按光子能量分类：第8页/共86页8.1.2 分子发光分析法的特点 基于化合物的荧光/磷光测量而建立起来的分析方法称为分子荧光/磷光光谱法。★灵敏度高, 比吸收光谱法低1~3个数量级；★试样量小, 线性范围宽；★选择性比吸收光谱法好，因为能产生紫外可见吸收的分子不一定发射荧光或磷光；★应用范围不如吸收光谱法广;★ 在传感器, 生物医药和环境科学等方面的研究具有优越性。第9页/共86页泡利不相容原理8.2 分子荧光和磷光光谱分析法8.2.1 基本原理1荧光和磷光的产生激发后分子的多重性可能改变( S/T两态). Ground singlet stateExcited state 第10页/共86页 单重态: 所有电子自旋都配对的分子的电子状态。大多数有机物分子的基态是单重态。当基态一对电子中的一个被激发到较高能级，其自旋方向没有改变，分子仍处于单重态。 三重态: 有两个电子的自旋不配对而平行的状态。激发三重态能量较激发单重态低。第11页/共86页 激发态分子的失活: 激发态分子不稳定，要以辐射或无辐射跃迁的方式回到基态。无辐射跃迁过程：☆振动弛豫：激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高，10-14 ～ 10-12s内完成。☆内转换：电子在相同多重态的两个能级间，由高能级回到低能级的过程。 ☆系间窜越：不同多重态间进行的跃迁, 激发态分子的电子自旋发生倒转: S1→T1。在10-2～10-6s内完成。第12页/共86页第13页/共86页辐射跃迁: 荧光Fluorescence： 受光激发的分子从S1的最低振动能级回到基态S0所发出的辐射。寿命10-8 ~10-10s，是相同多重态之间的跃迁，跃迁几率、速度较大，速率常数kf为106~109s-1。 磷光Phosphorescence： 从T1态的最低振动能级回到基