《现代生物技术制药》课程考试大纲（专升本考试）.pdfVIP

《现代生物技术制药》课程考试大纲 一、考试教材 1、生物技术制药（第 2 版）夏焕章，熊宗贵编，高等教育出版社。 2 、生物技术制药（第 2 版）王凤山主编，人民卫生出版社。 二、考试方式 闭卷，笔试，考试时间 120 分钟。 三、考试大纲 第一章 绪论 需要掌握的知识点： 1、生物技术药物的概念：一般来说，采用 DNA 重组技术或其他生物技术研制的蛋白质 或核酸类药物。 2 、生物药物按其功能用途的分类：（1）治疗药物；（2 ）预防药物；（3 ）诊断药物。 3、生物技术药物的主要特性：（1）分子结构复杂；（2 ）具有种属特异性；（3 ）治疗针 对性强，疗效高；（4 ）稳定性差；（5 ）基因稳定性；（6 ）免疫原性；（7 ）体内的半衰期 短；（8 ）受体效应；（9 ）多效性和网络效应；（10）检的特异性。 4 、生物技术制药的特性：高技术；高投入；长周期；高风险；高收益。 第二章 基因工程制药 1、了解主要的生物技术药物的类型：主要是指医用活性蛋白和多肽类，包括：（1）免 疫性蛋白，各种抗原和单克隆抗体等；（2 ）细胞因子，如各种干扰素、白细胞介素、集 落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子等；（3 ）激素，如胰岛素、生长激素、心钠 素等；（4 ）酶类，如尿激酶、链激酶，葡激酶，组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化 物歧化酶等。 2 、举例我国科学家基因工程药物的成就：成功地研制出世界上第一个采用中国健康人 白细胞中克隆的A B 型干扰素基因，组建杂交质粒，传染大肠杆菌使之高效表达的人 1 A B 干扰素。 1 3、掌握以下几个概念： （1）融合蛋白：融合蛋白的氨基端是原核序列，羧基端是真核序列，这样的蛋白 1 质是由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的。 （2 ）非融合蛋白：是指在大肠杆菌中表达的蛋白以真核的 mRNA 的AUG 为起始， 在其氨基端不含任何细菌多肽序列。 （3 ）接种量：是指移入的种子液体积和培养液的体积的比例。 4 、掌握基因工程药物制造的主要步骤 获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌→培养工程菌→产物分离纯化→ 除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装。 5、掌握反转录法克隆基因的主要步骤 （1）mRNA 的纯化；（2 ）CDNA 第一链的合成；（3 ）CDNA 第二链的合成；（4 ） CDNA 克隆；（5 ）将重组体导入宿主细胞；（6 ）CDNA 文库的鉴定；（7 ）目的CDNA 的分离和鉴定。 6、真核细胞 mRNA 的纯化方法 真核细胞 mRNA 结构特点：3 ˊ -polyA （20-250AAA ），通过该机构特点可以知道： -oligo(dT)与 3 ˊ -polyA （20-250AAA ）配对，形成氢键结合，这样可以建立真核细胞的 纯化方法。 具体步骤为： （1）合成 Oligo(dT)，并与与 纤维素结合，制备 Oligo(dT)-纤维素复合材料，作为 分离介质； （2 ）将 Oligo(dT)-纤维素复合材料装柱，RNA 提取液上样，Poly(A)--Oligo(dT)配 对结合； （3 ）用高浓度（100mM）NaCl 洗脱, 将 rRNA/tRNA 洗脱； （4 ） 用低浓度（ 10mM ）Tris - （1mM ） EDTA 溶液洗脱，获得 纯化的 Poly(A)mRNA 。 7、了解目前克隆真核基因常用的方法 化学合成和反转录法。 8、了解基因表达的宿主细胞 （1）原核生物细胞，目前常用的有大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，链霉菌。 （2 ）真核生物细胞，常用的有酵母，丝状真菌。 目前使用最广泛的宿主菌是大肠杆菌和酿酒酵母。 9、影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素 （1）外源基因的剂量； （2 ）外源基因的表达效率：包括启动子的强弱、核糖体结合位点的有效性、SD 序 列和起始密码的间距、密码子组成等因素。 2 （3 ）表达产物的稳定性； （4 ）细胞的代谢负荷； （5 ）工程菌的培养条件。 10、了解质粒的不稳定的类型 分为