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Thin-Layer Chromatography: Qualitative Analysis 目前二十八页\总数六十八页\编于二十点 固定相：氧化铝 Acidic: -Al-OH Neutral: -Al-OH + -Al-O- Basic: -Al-O- 目前二十九页\总数六十八页\编于二十点 硅胶吸附薄层层析 吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶 硅胶：表达式为SiO2·XH2O。层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（－Si－OH），这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附. 目前三十页\总数六十八页\编于二十点 硅胶吸附薄层层析的特点： 　　① 硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。 　　②　硅醇基显较弱的酸性，因而，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。 　　③　硅胶的活化温度通常为105℃－110℃，不能过高。 目前三十一页\总数六十八页\编于二十点 2、操作步骤—薄层板的制备 1、调浆 称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状。 2、涂布 取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。 3、干燥 将玻璃板水平放置，室温下自然凉干。 4、活化 70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。 目前三十二页\总数六十八页\编于二十点 目前三十三页\总数六十八页\编于二十点 展开剂的选择 目前三十四页\总数六十八页\编于二十点 1、位置：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm。 2、取样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，取样量为毛细管柱高5cm。 3、点样：点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。 Ala Arg Gly Mix 轻触疾起 操作步骤—点样 目前三十五页\总数六十八页\编于二十点 (a)点状点样 (b)条状点样 (c)颈部点样 (d)沟槽点样 目前三十六页\总数六十八页\编于二十点 半自动点样仪 手动点样器 目前三十七页\总数六十八页\编于二十点 操作步骤— 展层、显色 Ala Arg Gly Mix 将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线，用热风吹干或在85℃下烘干，即可显出各层斑点。 目前三十八页\总数六十八页\编于二十点 目前三十九页\总数六十八页\编于二十点 目前四十页\总数六十八页\编于二十点 物理显色 含有共轭双键的有机物质能吸收紫外光，将分离后的薄层板置于紫外灯下，组分薄层呈现暗色斑；如果采用硅腔GF(或其它含有荧光指示剂的吸附剂)铺成的薄层，在紫外光照射下，整个薄层呈显黄绿色荧光，斑点部分呈现暗色，更为明显。 利用蒸气熏显色时，常用的试剂有固体碘、浓氨水、液体溴。进行显色时，把这些易挥发的试剂放置在密闭容器内（例如标本瓶、标本缸、干燥器等），使它们的蒸气充满整个容器，将已展开并已挥发去溶剂的薄层板放入其中，使之显色。 目前四十一页\总数六十八页\编于二十点 化学显色的方式通常有直接喷雾法和浸渍法两种。 化学显色常用的显色剂剂大致可以分为两类，即通用显色剂和专属性显色剂。 通用显色剂：对未知化合物的检测，可以考虑先用通用显色剂。这种显色剂是利用它与被测组分的氧化还原反应、脱水反应及酸碱反应等而显色的，常用的有50％的硫酸溶液、酸碱指示剂溶液、5％磷钼酸乙醇溶液、荧光显色剂等。 目前四十二页\总数六十八页\编于二十点 目前四十三页\总数六十八页\编于二十点 目前四十四页\总数六十八页\编于二十点 ： ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 目前四十五页\总数六十八页\编于二十点 目前四十六页\总数六十八页\编于二十点 结果计算 Rf = 斑点至原点距离 溶剂前缘至原点距离 小心量出斑点中心至原点中心距离，再量出原点中心至溶剂前沿的距离，计算出它们的 Ｒｆ值。 根据Ｒｆ值，鉴定出混合样品中氨基酸的种类，并绘出层析图谱。 目前四十七页\总数六十八页\编于二十点 薄层色谱扫描仪 目前四十八页\总数六十八页\编于二十点 目前四十九页\总数六十八页\编于二十点 目前五十页\总数六十八页\编于二十点 目前五十一页\总数六十八页\编