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重组DNA转化及筛选实验报告 实验背景：DNA重组技术是近年来发展最快、最具应用前景和最成功的基因工程技术之一，它是通过将不同DNA分子按照一定的比例和方法组合成新的DNA分子，从而构建具有新功能的DNA分子。其中，将外源DNA转化到宿主细胞内成为了获得重组DNA的一种常见方法。转化是指外源DNA通过物理或化学处理，使其能够被宿主细胞主动摄取并加以利用的过程，通常通过发热冷冻法、CA++离子处理法、电磁转化法等方法实现。实验目的：本次实验的主要目的是掌握DNA重组技术中常见的重组DNA转化和筛选方法，加深对于基因工程和生物技术的理解。材料与方法：1. 材料（1）外源DNA：pUC18\GFP质粒。（2）宿主细胞：大肠杆菌BL21。（3）培养基：LB培养基（含有Ampicillin抗性剂）。（4）磷酸缓冲液：PH 7.4，含有40 mM KCl，10 mM Na2HPO4，1.8 mM KH2PO4。（5）PEG混合液：PH 6.7，含有50 mM CaCl2，10 mM MgCl2，10 mM MnCl2。（6）冰浴盒、热浴器、洗瓶、恒温振荡器、无菌移液器、微量吸管。2. 方法（1）重组DNA转化步骤1：将宿主细胞预培养在LB平板上，使其达到指定生长状态。步骤2：准备转化液，并行操作A和B两个步骤：A：将200 μL CO2-H2O（1:1）和10 ng外源DNA混合，并在室温下不停地轻轻摇动。B：在另一个无菌试管中，加入80 μL PEG混合液和20 μL转化液A混合液，摇匀，放置5分钟。步骤3：将250 μL转化液B加入含有1.5 mL LB培养基的无菌离心管中，轻轻摇晃，静置在室温下20分钟。步骤4：接种转化液到预培养的菌群上，划线后于37℃的恒温振荡器中振荡培养数小时。（2）重组DNA筛选步骤1：将适当的挥发性杀菌剂喷雾到实验台表面和操作台内，之后摆放进一级无菌操作台内。步骤2：将选定的生长抑制剂混合到无菌LB平板中，调整菌落数量以适合筛选目标。步骤3：从重组转化菌落中选取符合筛选条件的菌落，进行纯化、测序等一系列后续操作，最终得到我们需要的重组DNA分子。实验结果：实验中共进行了10组重组DNA转化实验和3组重组DNA筛选实验，结果表明，通过采用合适的条件和步骤，可以成功地将外源DNA导入到宿主细胞中，并通过筛选方法获得目标重组DNA分子。结论：重组DNA转化和筛选是DNA重组技术中至关重要的两个步骤，整个过程分为转化、筛选、纯化和测序等多个环节。精确地掌握实验条件和方法，对于获取高质量、高纯度的重组DNA分子具有重要意义，并对于基因工程和生物技术的应用发展以及生物医疗的推广具有深远的意义。