- 1、本文档共15页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
.....
.
.
.
.
.
可编辑
可编辑
细胞培养常见污染的判别及应对措施
2011-01-02 10:19:04| 分类: 实验 | 标签:污染 无菌 细胞 培养基 灭菌 |字号大中小 订阅一、避免细胞培养污染的措施:
污染是细胞培养中一个大敌,一旦污染,前功尽弃!决定要进行细胞培养,首先一定要有强烈的无菌意识!操作中要遵守严格的操作规程,不要怕麻烦,越细心越好!注意以下几点,大部份的污染是可以避免 的:
每次开始实验前,先用紫外照无菌台和实验室 20 分,用酒精擦手,台面和不消毒的器械(如移液枪等);实验中,如允许,尽量多过火,开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处;使用无菌台后,再用酒精擦台面,紫外照 20 分!
滴管不要接触瓶口,吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
提取组织时,往往头会距离组织很近,所以带口罩很重要!还要换无菌衣(紫外照过的白大褂)。
注意配制完全培养基时不要发生污染,在使用前一定要做无菌培养,因为一般应用污染后的培养基培养细胞后,很快就会发生特别严重的污染。
操作时一定按照实验室的要求,切忌粗心大意。
使用完的东西尽快移出无菌台!另外无菌台上的器械,试剂摆放,也尽量遵循一定的顺序!依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染:
下面是几种细胞培养过程中常见的污染:
支原体污染:
传说中的黑焦虫,长得暴快。24 小时就满视野都是了。污染源大多数情况下是培养用血清。
图 1 支原体污染的光镜检测(圆圈所示,×10 倍)
图 2 支原体污染的光镜检测(×20 倍)
图 3 支原体污染的荧光检测
图 4 支原体污染的电镜检测(×30k,煎蛋状和其他形状)
图 5 支原体污染的电镜检测
念珠菌污染:
似乎无处不在,而且顽固得很。长得暴快(12h 就能在细胞上面密布)。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上,高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图 6 念珠菌污染的光镜检测(低倍镜)
图 7 念珠菌污染的光镜检测(高倍镜)
图 8 念珠菌污染的光镜检测(高倍镜)
图 9 念珠菌污染的检测(革兰氏染色阳性)
这么大面积的污染,你可以看看是不是操作上出了问题,要不然就是培养基的问题。既然已经污染了,就全部更换你的器皿。培养箱的水没有必要用无菌水,但最起码要是蒸馏水。
霉菌污染
比较常见的一种污染,常常来源于污染的空气、水和器械。
图 10 霉菌污染的光镜检测(低倍)
图 11 霉菌污染的光镜检测
(典型的霉菌污染,肉眼看到白色的团块或白点,镜下呈丝状。400 倍)
图 12 霉菌污染的光镜检测(树枝状,高倍)
图 13 霉菌污染的倒置显微镜检测(树枝状)
杆菌污染:
培养基中加入抗生素可以减少此种污染,但也不是绝对的。
图 14 杆菌污染的光镜检测(瑞氏染色,高倍)
图 15 杆菌污染的光镜检测(瑞氏染色,低倍)
细胞中的颗粒到底是怎么回事?
我的细胞总有颗粒,开始是细胞中有,后来细胞之间也好像有许多颗粒。好像是细胞碎片一样。是什么东西啊?是支原体污染吗?这可是我刚买回来的细胞啊!
我们实验室也有这种情况,是不是黑的小碎片,有人说是细胞代谢产物,后来拿到高倍镜下看还会动,就怀疑是污染了,也想问问大家到底是什么
是黑色的小碎片。我没注意到它会动,只是觉得不像是活的微生物。我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差,裂解出的东西。但是,是什么东西不清楚。
的确很常见
在以前帖子见到说是“黑焦虫”。长时间培养的很容易出现,我根据自己的经验估计是一种污染,因为随着黑点增多,本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现,我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。不过增加换液次数的情况下,好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。
以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题,可以有条件换进口血清试试,或者离心一下也可能能解决问题。那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊?有谁知道?
我培养的细胞也出现过此中问题,放到高倍镜下看时有东西在动,但培养液不混浊,估计不是细菌污染, 可能是血清问题,是支原体污染。
我培养的细胞也出现过这样的问题,我个人认为是一种支原体污染。国产血清是罪魁祸首,因为只要将细胞饥饿一下,不超过 24 小时,这种东西就会疯长
我培养的细胞也有出现这中情况。但是并不影响细胞生长。应该不是支原体污染
最近,我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西,尽管我用的是 GIBCO 的 FBS,后来,每天换液之前洗几遍后,就慢慢变少,现在没了
细胞培养的细菌污染
我们新建的细胞室。每周都会做清洁,用 0。2%新洁尔灭消毒,照紫外。实验前也会照至少 30 分钟。培养基中加青霉素,链霉素。可是培养细胞时还是常有细菌污染,有时甚至分析不出原因。用培
文档评论(0)