生物工业下游技术双水相萃取法概要.pptxVIP

生物工业下游技术双水相萃取法概要; 普通的有机溶剂萃取法难于应用 于蛋白质的分离： 许多蛋白质都有极强的亲水性，不溶于有机溶剂； 蛋白质在有机溶剂相中易变性失活。; 基因工程产品如蛋白质和酶往往是胞内产品，需经细胞破碎后才能提取、纯化，细胞颗粒尺寸的变化给固—液分离带来了困难，同时这类产品的活性和功能对pH值、温度和离子强度等环境因素特别敏感。 由于它们在有机溶剂中的溶解度低并且会变性，因此传统的溶剂萃取法并不适合。; 因此基因工程产品的商业化迫切需要开发适合大规模生产的、经济简便的、快速高效的分离纯化技术。 其中双水相萃取技术(two-aqueous phase extraction,ATPS)，又称水溶液两相分配技术(Partion of two aqueous phase extraction)是近年来出现的引人注目、极有前途的新型分离技术。 ;双水相;能够保留产物的活性; 整个操作可以连续化; 在除去细胞或细胞碎片时，还可以纯化蛋白质2～5倍; 处理量相同时，双水相萃取法比传统的分离方法，设备需用量要少3～10倍。 ; 双水相萃取法和传统的分离方法(如盐 析或有机溶剂沉淀等)相比也有很大的优势， 如以β-半乳糖苷酶为例，用沉淀或双水相萃 取纯化的比较见下表。 ; 用此法来提纯的酶已达数十种，其分离过程也达到相当规模，如乙醇脱氢酶的分离已达到几十千克湿细胞规模，β-半乳糖苷酶的提取也到了中试规模等。 ;第一节 双水相分离理论 ; 当两种聚合物互相混合，分层或混合，取决于： ?体系熵的增加； ?分子之间作用力。 两种被混合分子间如存在空间排斥力，它 们的线团结构无法相互渗透，在达到平衡后就 有可能分成两相，形成双水相。 ; 当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大，分子间的相互排斥作用与混合过程的熵增加相比占主导地位，一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。;在生化工程中广泛应用的双水相体系有： 聚乙二醇（PEG）/葡聚糖(Dex)体系，该双水相的上相富含PEG，下相富含Dex??? 除双聚合物系统外，聚合物与无机盐的混合溶液也可形成双水相，例如，PEG/磷酸钾(KPi)、PEG/磷酸铵、PEG/硫酸钠等常用于生物产物的双水相萃取。PEG/无机盐系统的上相富含PEG，下相富含无机盐。 ; ;a; 在系线上各点处系统的总浓度不同，但均分成组成相同而体积不同的两相。两相的体积近似服从杠杆规则，即;三、物质在两相中的分配;双水相中的分配平衡; 有关双水相系统中溶质分配平衡的理论已有很多研究报导。但是，由于影响双水相系统中溶质分配平衡的因素非常复杂，很难建立完整的热力学理论体系。从双水相萃取过程设计的角度出发，确定影响分配系数的主要因素是非常重要的。; 已有的大量研究表明，生物分子的分配系数取决于溶质与双水相系统间的各种相互作用，其中主要有静电作用、疏水作用和生物亲和作用等。因此，分配系数是各种相互作用的和: ;影响物质分配平衡的因素; 这些系统复杂性表现在如下的一些例子中：在一相中引入疏水性基团会影响离子的分配和电位，在大分子(亲水聚合物或蛋白质溶质)结构中构象的变化，能使另一些原子暴露在微环境中。这些事实导致只能用实验的方法来确定满足分配要求的操作条件。 ; 双水相系统作为一种成功的萃取方法，很大程度上取决于使用的聚合物类型，当两种不同聚合物的溶液混合时，可能存在三种情况： ;; 系线长度代表了系统达到平衡时上、下相和总组成的关系，在临界点附近系线的长度趋向于零，上相和下相的组成相同，因此,分配系数应该是1。随着聚合物和成相盐浓度增大，;盐和缓冲液的影响;例如，PEG/KPi系统中上、下相(或称轻重相)的PEG和磷酸钾浓度以及Cl离子在上、下相中的分配平衡随添加NaCl浓度的增大而改变。这种相组成即相性质的改变直接影响蛋白质的分配系数。 离子强度对不同蛋白质的影响程度不同，利用这一特点，通过调节双水相系统中的盐浓度，可有效地萃取分离不同的蛋白质。;温度的影响;第二节 双水相系统的应用; 双水相萃取自发现以来，无论在理论上还是实践上都有很大的发展。在最近几年中更为突出,在若干生物工艺过程中得到了应用，其中最重要的领域是蛋白质的分离和纯化，其应用举例如表所示。;欲提取的酶与细胞碎片应分配在