薄层色谱完整版.pptVIP

薄层色谱;概 述;色谱法;薄层色谱（Thin Layer Chromatography）;;基本原理;例如：用硅胶作吸附剂，其主要是根据吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。 当溶剂沿着硅胶吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附、解吸、反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点，从而达到分离的目的。;相关参数;影响Rf值的因素： （1）展开温度 ：室温对分离影响不明显。其他条件相同，温度低比温度高时展开慢，分离好。 （2）薄层厚度：板厚度变化对比移值影响明显；厚度达0.2mm时，影响较小；在0.25mm时，分离效果最佳。 （3）吸附剂含水量：与吸附剂的种类、使用时的加水量、风干时间、活化温度、活化时间等因素有关。 （4）层析缸中蒸气：缸中蒸气未达饱和时，比移值不能重现。为使缸中蒸气饱和，可以在缸内壁附上一层滤纸，让展开剂全部湿润；把展开剂放入层析缸一段时间后再放薄层板；尽可能在恒定温度下层析。 （5）其他影响因素：展开剂的pH、展开时间、展开距离、样品浓度、点样量、薄层板所用吸附剂中的粘合剂的种类和用量等，都有可能影响样品组分比移值的大小。;薄层色谱分类;常规制备薄层色谱;吸附剂就其性质而言，可分为有机吸附剂（如聚酰胺、纤维素和葡聚糖等）和无机吸附剂（如氧化铝、硅胶、硅藻土、磷酸钙、磷酸镁和硅酸钙镁等）。最常用的是氧化铝和硅胶，它们的吸附性能好，适用于多种化合物的分离。 常用的吸附剂厚度为0.5～2.5mm，色谱板的尺寸一般为20cm×20cm或20cm×40cm。薄层厚度与薄层板的尺寸限制了PTLC可以分离的样品量。 1.0mm厚的硅胶板最多可上样5mg／cm2。硅胶是最常用的吸附剂，可用它来分离亲脂或亲水性物质。;　　 PTLC板可以自己制备，也有预制板出售。自制PTLC板的优点在于吸附剂的厚度及组成可调节(最厚可达5mm)，也可以在吸附剂中掺入硝酸银及缓冲物质。;注意事项 ;2.流动相（ 展开剂）的选择 　　 展开剂选择是否适当是薄层分离的重要条件之一。在吸附薄层色谱中，选择展开剂主要是由被分离物质的极性、吸???剂的活性以及展开剂本身的极性来决定. 在薄层色谱中，一般先选择单一溶剂作展开剂，但对难分离组分，则需要使用二元、三元甚至多元的溶剂。先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合为止。 　　 ; 对普通酸性组分：特别是离解度较大的弱酸性组分应在展开剂中加入一定比例的酸，可防止拖尾现象； 对于碱性物质：如某些生物碱，多数情况是选用氧化铝为吸附剂，选用中性溶剂为展开剂。若采用硅胶为吸附剂，则选用碱性展开剂为宜；但对某些碱性较弱的生物碱可使用中性展开剂。 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大。 各组分理想的比移值在0.2-0.8之间。;化合物的极性、吸附剂的活性及展开剂的极性配合 a.分离非极性物质时，应选择非极性展开剂和高活性吸附剂； b.分离强极性物质时，则应选择强极性展开剂和活性较低的吸附剂； c.分离中等极性物质，则应选择中等极性物质和中等活性吸附剂。;操作步骤;;点样注意事项 a.样品的浓度应在5％～10％左右。点样带应尽可能狭窄，以获得更好的分离效果。溶解样品的溶剂要尽量避免用水，因为水溶液斑点容易扩散，且不易挥发。 b.适当的点样量，可使斑点集中，点样量过大，易拖尾或扩散；点样量过少，不易检出。点样量多少，应视薄层的性能及显色剂的灵敏度而定，此外还应考虑薄层的厚度。一般是几微克到几十微克。 c.尽量用小的点样管，如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。;2.展开 将点好样的薄板与流动相接触，使两相相对运动并带动样品组分迁移的过程称为展开。　　 　 ;边缘效应：展开时薄板边缘的Rf值高于中部的Rf值的现象。它主要是由于色谱槽中的不饱和状态和展开剂在薄板不同部位分配不同而引起的。 影响展开的因素有: 相对湿度; 溶剂蒸汽（a 展开室的饱和 b预吸附）; 温度；展距。 ;3.显色与定位 常见的显色方法：　　　 物理显色法： 　①荧光样品，不少有机物在紫外灯照射下会出现不同的荧光，许多金属离子与8-羟基喹啉的化合物在紫外线下也会呈现不同色调的荧光； 　②荧光背景，含荧光剂的薄层板在紫外线照射激发下背景显荧光，无荧光性样品斑点呈暗色。 　生化显色法： 一些生化物质对某些微生物的生长具有显著的促进或抑制作用。 　　　;化学显色法： 　①喷射显色，采用适宜的显