【DNA重组】第22章-八版-基因结构与功能分析.pptx

第二十二章 基因结构与功能分析技术 ;人类的多种疾病都与基因的结构或功能异常有关，因此，要阐明疾病发生的分子机制和进行有效的诊断与防治，均需首先揭示基因的结构与功能。 DNA序列测定 基因转录起点及其启动子的分析 基因编码序列的分析 基因拷贝数及其表达产物的分析 基因功能获得和/或缺失策略 随机突变筛选策略;第一节 基因结构分析技术 ;一、基因一级结构解析技术 ;70年代末，Walter Gilbert发明化学法、Frederick Sanger发明双脱氧终止法手动测序，同位素标记 80年代中期，出现自动测序仪（应用双脱氧终止法原理）、荧光代替同位素，计算机图象识别 90年代中期，测序仪重大改进、集束化的毛细管电泳代替凝胶电泳 2001年完成人类基因组框架图;（一）双脱氧法和化学降解法是两种常规的DNA测序方法 ;1 .变性模板的制备;（构成RNA）;5′-末端;ddATP;3. 测序反应物电泳??序列读取;化学试剂处理DNA片段，造成DNA的特异性切割，产生一组具有各种不同长度的DNA链的反应混合物，经凝胶电泳分离。化学切割反应：包括碱基的修饰;修饰的碱基从其糖环上转移出,在失去碱基的糖环处DNA断裂。;肼（C+T）、硫酸二甲酯(G)、甲酸(A+G)、肼+氯化钠（C）;C;Maxam-Gilbert化学降解测序法 ;（二）全自动激光荧光DNA测序技术的原理基于Sange