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血清学试验资料第1页/共45页 动物微生物血清学试验的概念由于抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。 第2页/共45页 动物微生物血清学试验的特点特异性和交叉性 敏感性 可逆性 反应的二阶段性 最适比例与带现象 用已知测未知 第3页/共45页 动物微生物特异性和交叉性特异性 抗原只能与相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。 交叉性 两种不同的抗原之间含有共同的抗原决定簇，则发生交叉反应 。第4页/共45页 动物微生物反应的二阶段性 第二阶段 抗原抗体复合物出现可见反应阶段。此阶段反应慢、需数分钟、数十分钟或更久。第一阶段 抗原与抗体的特异性结合阶段，此阶段反应快、仅数秒至数分钟，但不出现可见反应。第5页/共45页 动物微生物敏感性抗原抗体的结合还具有高度敏感性的特点，不仅可检测定性，还可以定量检测微量、极微量的抗原或抗体。第6页/共45页 动物微生物最适比例与带现象抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现肉眼可见反应。抗体除IgM是5价，SIgA 4价外，一般抗体都含有两个结合位点（二价）；抗原则根据分子大小，有10～50个不等的结合点。当抗原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结合点，可以继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体结合物的未饱和点相联结，逐渐形成愈来愈大的复合物，出现了肉眼可见反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物愈多。如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见反应，谓之带现象。第7页/共45页 前带 后带 第8页/共45页 动物微生物可逆性抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这种结合是可逆的，结合条件为0℃～40℃、pH4～9。如温度超过60℃或pH降到3以下，或加入解离剂时，则抗原抗体复合物又可重新解离，并且分离后抗原或抗体的性质仍不改变。第9页/共45页 动物微生物用已知测未知所有的血清学试验都是用已知抗原测定未知抗体，或用已知抗体测定未知抗原。第10页/共45页 动物微生物影响血清学试验的因素电解质：血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，才出现可见反应。0.9%氯化钠溶液。8-10% 温度：在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速抗原抗体结合和反应现象的出现 。第11页/共45页 动物微生物酸碱度：血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。 振荡：适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞，加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体复合物解离。 杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。 第12页/共45页 动物微生物血清学试验的类型凝集试验 沉淀试验 补体结合试验 中和试验 免疫标记技术第13页/共45页 动物微生物凝集试验的概念细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，经过一定时间，复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。 第14页/共45页 动物微生物凝集试验的类型直接凝集试验 间接凝集试验 第15页/共45页 动物微生物直接凝集试验概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试验。 类型：按其操作方法可分为玻片法和试管法。 第16页/共45页 动物微生物1．玻片凝集试验方法：在玻璃板或瓷片上进行。 特点：简单、快速。 用途：定性试验，如细菌鉴定、血型鉴定等。第17页/共45页 动物微生物2．试管凝集试验方法：在试管中进行。 特点：准确、耗时。 用途：定量试验，如诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价。第18页/共45页 第19页/共45页 结果判定结果用“+”表示反应强度。++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。+++ ：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。++ ：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。+ ：液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。— ：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物（马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集价判为可疑。如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。 第20页/共45页 动物微生物间接凝集试验概念： 将可溶性抗原或抗体与载体连接后，再与相应的抗体或抗原作用，所出现的特异性凝集反应为间