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标准菌种管理规程 目的:规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率,确保 菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠. 职责：QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发,微生物检验员负 责菌种的确认、传代、使用及销毁。 范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传 代、使用及销毁等. 内容： 1 术语 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理 中心提供的冷冻干燥菌。 传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存 的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养 后，作为日常工作使用的菌种. 菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即 称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第 0 代。 2.标准： 2 。1 检定菌的申购 QC 主管每年根据检定菌种的使用情况 （包括临时检验需要），提出购 买计划,交 由质量管理部部长审批后, 向中检所菌种保藏中心或省 （市) 药检所购买冻干菌种 （标准菌种）;也可以直接向省(市）药检所购买 传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代 数。 2 。2 检定菌的接收 菌种到达实验室后，由QC 主管接收菌种，检查其名称和数量，以及 每一支的完整性, 同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》 （附表1）上, 内容包括：名称、数量、编号(无编号者按检定菌种的 编号原则编号)、代数、来源、接收日期、接收人等,贴好标签并储存 于2-8˚C 直到需要使用时。储存期最长不超过5 年. 2.3 检定菌的保存 2 。3.1 工作用菌种的保存 工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养 基上，待菌生长充分以后，转移至 2～8℃冰箱中保存。此法仅用于 工作用菌种的短期保存,并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发 现异常情况,经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同， 细菌:1 个月；酵母菌：2 个月；霉菌及芽胞：3 个月。 2 。3 。2 传代用菌种的保存 采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法. 2.3 。2 。1．甘油冷冻管保存法 用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面 的菌苔,并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到 预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，使其等同于10 号 比浊管, 向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油(浓度20 ％)，即 为 10％甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合,分装于无菌小试 管,在—20℃冷冻条件下保存。此甘油冷冻管为第2 代（G2 ）,保存期 限为5 年.使用时，取出一支放至室温,转种增菌培养或接种至琼脂斜 面复苏，挑取纯菌落传代或工作用。此种方法主要适用于需氧细菌和 酵母菌的保藏（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌）。 2 。3 。2 。2．液体石蜡保存法 2 。3 。2 。2 。1．无菌液体石蜡的制备：选用优质化学纯液体石蜡， 将液体石蜡分装加塞，用牛皮纸包好，在121℃灭菌30 分钟，置40 ℃ 恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后备用. 2 。3 。2 。2。2．液体石蜡管的制备:将菌种穿刺接种于半固体高层培 养基中，在适宜条件下培养结束后，在层流台下用无菌吸管吸取上述 无菌液体石蜡至培养好的菌种管内,并使石蜡高出菌种表面约 1cm 使 菌体与空气隔绝，并将试管直立，置于-20 ℃冷冻冰箱中保存。此法 主要适用于霉菌、厌氧菌、放线菌、芽孢杆菌的保存（如枯草芽孢杆 菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）. 2 。3.3 ．各菌种的保存方法、条件及期限，见 《传代用菌种保存方法、 保存温度、保存期限》(附件1）. 2 。4 ．检定菌的传代 检定菌菌种的传代因冻干菌（标准菌种）与传代用菌种而不完全相同。 2 。4 。1．标准菌种的复苏、确认、传代 2.4 。1.1．标准菌种的复苏 2 。4 。1。1.1．把冻干菌种管、灭菌毛细滴管（1ml）、双碟、镊子、 营养肉汤培养基（或其它适宜培养基）数支，移入接种室或超净工作 台. 2 。4 。1。1。2．将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒，稍干，用75 ％ 乙醇棉擦净,放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将标准菌种管的 封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌毛细滴管吸取营养肉汤培养基 （或其它适宜的培养基），滴在灼热的菌种管封口一端,使骤冷而炸 裂。 2 。4.1.1 。3 ．取灭菌镊子，在火焰旁,将炸裂的管口打开，