TALEN活性检测与基因型鉴定.pptxVIP

TALEN活性检测与基因型鉴定第1页/共31页第2页/共31页一、 TALEN活性检测1.细胞转染2.测序套峰实验3. 错配酶实验第3页/共31页流程C6细胞转染TALEN pair提取基因组PCR扩增靶位点测序错配酶实验第4页/共31页1. TALEN转染C6细胞构建好的TALEN质粒成对转染细胞（详见SOP）。收细胞基因组，PCR扩增目的基因片段。第5页/共31页2. 测序实验PCR并将产物送测序，测序结果分析，举例如下：Rag2 wtTALEN Rag2-38第6页/共31页3. 错配酶实验 (MSD assay)-原理及流程E2E3E4错配酶：一类可识别并切割异源DNA错误配对位点的内切酶。（NEB：T7EI）TALEN-L target seq.Spacer TALEN-R target seq.5’-tgcccagcagcagcggccttacggctatgagcaggca agctttgtgggtgctctgccga-3’ 3’- acgggtcgtcgtcgccggaa tgccgatactcgtccgt tcgaaacacccacgagacggct -5’F1R1Fragment 1Fragment 2第7页/共31页PCR扩增目的基因片段PCR产物纯化纯化产物变性、退火错配酶切退火产物第8页/共31页T7EI-T7EI+3. 错配酶检测 (MSD assay)