原创力文档Western Blot 相关试验方法与试剂〔湿转法〕 人工肝试验室学习 姚瑶
〔一〕 目的蛋白提取：
〔1〕单层贴壁细胞总蛋白的提取：
1、倒掉细胞培育液，参加 Hanks 液洗涤一次后倒掉，依据所用细胞打算是否用胰酶消化，参加适量〔约5ml〕颖细胞培育液后，将贴壁细胞吹起，并转移至 4 支离心管内，配平后，1500 转离心 10min。
2、倒掉上清，用 4 度预冷 PBS 溶液洗涤沉淀，1500 转离心 10min。
共洗三次，每次格外钟。
4、超声波细胞裂解仪上将各管裂解 15s。〔可不做〕3、倒掉上清，吸净，每管参加50ul 细胞裂解液RIPA，吹散，参加后由于 DNA 的释放可快速变粘稠，故应尽快转移至 1.5ml EP 管内，
4、超声波细胞裂解仪上将各管裂解 15s。〔可不做〕
5、4℃，12023 转离心 10min。
6、将上清转移至 0.5ml EP 管中，每管 100ul，冰浴待用。
〔2〕组织中总蛋白的提取：
1、取约 100mg 肝组织于研磨器内，参加 500ul 细胞裂解液RIPA，研磨后吸出于 1.5ml EP 管内，再参加 500ul RIPA，研磨后吸出于上EP 管内。冰上裂解 30min。
2、配平后，4℃，14000 转离心 10min。
3、将上清分装于 0.5ml EP 管内，每管 100ul，冰浴待用
〔二〕蛋白含量的测定：
1、稀释标
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