CD34阳性细胞绝对计数的流式细胞术测定指南.docx

CD34 阳性细胞确定计数的流式细胞术测定指南〔主整版〕 造血干细胞移植〔HSCT〕是治疗血液系统疾病、自身免疫性疾病、某 些实体瘤和基因缺陷疾病的重要手段之一。在 HSCT 的过程中,采集足够 数量的造血干细胞〔HSC 〕是 HSCT 成功的关键。但至今为止，尚无一个 与体内重建筑血完全吻合的 HSC 体外检测法。早期，人们通过有核细胞 计数、 集落形成单位〔CFU 〕来计算移植物中HSC/造血祖细胞〔HPC 〕 数量，但前者与 HSC 数量全都性差,后者试验变异性大、耗时长，其临 床有用性大大减弱。20 世纪80 年月,CD34 分子在造血祖细胞上表达的 觉察，为临床 HSCT 供给了可评估植入最低阈值的强有力工具。尽管近年 来体外争论说明，人类CD34 阴性脐血组分也有造血活性,然而大量的临 床硏究证有用富含 CD34+ 细胞组分移植可安全、长久地获得多系造血重 建［1,2］。因此，目前临床及试验室仍旧是应用 CD34+细胞进展 HSCT、 基因转染和 HPC 扩增，而流式细胞术计数 CD34+细胞因具有快速、简便、 可定量等特点，已广泛应用于移植物中 HSC/HPC 数量的检测及确定采集 时机等［3,4,5］。流式细胞术计数 CD34+细胞经受了从单参数到多参数分 析、从双平台到单平台计数、从各试验室自由抗体组合到商业化试剂盒应 用等一系列的演化。1995 年血液病治疗与移植国际联合会〔International Society of Hematotherapy and Graft Engineering , ISHAGE〕成立了 干细胞计数小组，致力于寻求一种快速、简便、敏感、对不同的流式细胞 仪都有效的流式细胞术 CD34+细胞计数方法。1996 年 ISHAGE 承受了 Sutherland 等提出的 CD45/CD34 双色标记多参数累积设门的方法,被 命名为 ISHAGE 方案⑸。ISHAGE 方案等双平台计数法 先通过流式细胞术 分析得出CD34+细胞百分比,再结合血细胞计数仪计数的白细胞数得出 CD34+细胞确定数。不同试验室间的血细胞计数仪可能存在肯定的系统误 差，洗涤过程中易造成某些细胞成分的丧失，因此双平台 CD34+ 细胞计 数法在不同试验室间存在很大的变异性［6］。单平台CD34+细胞计数法是 在计数管中参加数量的荧光微球,承受流式细胞术猎取CD34+细胞 百分比的同时，依据猎取的密度的荧光微球数来计算出 CD34+细胞确定数。单平台计数法裂解红细胞后不需洗涤，不需要承受血细胞计数仪 计数白细胞，因此系统误差小，被认为是首选的 CD34+细胞计数方法［5,7,8］。 无论是 ISHAGE 方案还是单平台流式细胞术 CD34+细胞计数法 都需要多参数累积设门，技术要求高。国外室间质量评估资料显示各试验 室间的 CD34+ 细胞计数仍存在很大的差异，分析其缘由包括未依据要求 设置各散点图窗口； 随便增减散点图的数量和转变散点图的分析参数；未 留意设定阈值的参数等 ［9］。不同厂家的试剂盒、不同的分析方案、单平台 还是双平台、溶血洗涤法还是溶血免洗法以及流式细胞仪的型号等对 CD34+细胞计数的结果可能会有肯定的影响［10］。为保证各试验室 CD34+细胞计数结果的牢靠性和可比性冲国免疫学会血液免疫分会临床 流式细胞术学组经过反复争论，制定符合我国国情的流式细胞术 CD34+ 细胞计数指南，供各试验室参考和承受。一、标本采集 *1 患者信息及标本标识： 全部检测用标本应准时贴上标签，标签上应注明患者的姓名、唯一的 识别码、标本类型、标本采集的日期和时间。填写检查申请单，申请单应 和标本粘贴在一起送检，申请单上应标明患者的姓名、患者唯一的识别码、年龄、 性别、标本采集日期和时间、申请医师的姓名和标本类型(如：全 血)、检测工程及相关的临床信息，进展双平台检测时还需供给白细胞计 数和分类信息。2?抗凝剂的选择： 标本承受不同的抗凝剂抗凝时 ,其稳定性会不同，乙二胺四乙酸钾盐(EDTA-K2/EDTA-K3 )抗凝的标本， 常温下可稳定保存 12~24 h ,超过 24 h 的 EDTA 盐抗凝标本中粒细胞可能会削减肝素钠或枸稼酸￥収 ACD ) 抗凝标本可稳定保存 48 h。假设标本需用血细胞同时进展白细胞计 数和分类，则应中选择EDTA 盐作为抗凝剂。因此外周血标本通常承受 EDTA 盐抗凝采集物通常承受 ACD 抗凝，骨髓和脐带血标本可承受 EDTA 盐、肝素钠或 ACD 抗凝。 3?标本质量： 标本处理的步骤越多，细胞丧失就越多。而这种丧失在不同类型白细 胞比例是不均等的。对于全血标本,溶血后不洗涤，可以使标本处理的步 骤减到最少。 (1 )标本目视观窸: 可观看到的问题常见有两种类型：一是