高中生物课件：（新教材）二轮复习专题：农杆菌转化法 原生质体培养与应用2023.pptx

（二）回答与获得抗除草剂转基因玉米有关的问题：回答：获得抗除草剂转基因玉米涉及到多次筛选，其中筛选含重组质粒的农杆菌应使用含______的选择培养基，使用含______的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。抗生素 除草剂10．（2019天津卷节选）B基因存在于水稻基因组中，其仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，但在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下实验。（3）在过程①、②转化筛选时，过程 中T-DNA整合到受体细胞染色体DNA上，过程 在培养基中应加入卡那霉素。② ； ① ①构建重组Ti质粒 ↓ ②导入农杆菌 ↓ ③筛选农杆菌 ↓ ④共培养 ↓ ⑤脱菌处理 ↓ ⑥筛选含目的基因的愈伤组织 ↓ ⑦生芽培养基 ↓ ⑧生根培养基 ↓ ⑨试管苗（获取目的基因的方法？用到的相关酶有哪些？酶切时限制酶的选择问题？）（经 处理的，该过程称为 ）（为什么要进行筛选？怎么筛选？）（为了提高转化效率，需要考虑哪些因素？）（怎样脱菌处理？）（为什么要筛选？怎样筛选？）（激素的配比？）（激素的配比？为了促进生根可采取哪些方法？）（为了更好的生长，从培养基中取出来之后要做什么？移栽至自然环境之前需要进行？）（所选的受体材料有讲究一般选择具有优良性状、较高的遗传稳定性、全能性表达充分、易被农杆菌侵染或对农杆菌敏感；共培养时一般用愈伤组织也可以用叶圆片，需要在黑暗的条件下进行。T-DNA片段转移、整合到染色体DNA上）（即去除农杆菌，为了减小农杆菌对愈伤组织再分化的影响，如用适宜浓度的抗生素溶液清洗几次）（思考：共培养时为了提高转化效率，需要考虑哪些因素？培养时间、培养温度、培养液的pH、有无光照、受体细胞的类型和生理状态、农杆菌的种类与浓度等）原生质体的培养与应用②原生质体的活力测定③原生质体的培养④形成完整植株总结原生质体培育新品种的方法：①制备（获取）原生质体[取材→消毒→酶解（在黑暗的条件下，在高渗的溶液中利用经过滤除菌的纤维素酶和果胶酶的混合酶液去除细胞壁）→离心]（染色法、渗透吸水失水）（可进行原生质体的融合或者通过显微注射将外源基因导入其中→形成重组细胞或转基因细胞→长出细胞壁→降低渗透压→形成细胞团）（通过体细胞胚发生途径或器官发生途径）2016.10 （二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答： （1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5mol/L甘露醇（维持较高渗透压）的 混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。 （2）原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该 培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、 和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是 。答案：(二) (1)纤维素酶和果胶酶 (2)降低 心形胚 细胞分裂素 2020.01 （二)回答与基因工程和植物克隆有关的问题: (1)为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经___________处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有___________________(答出2点即可)。 (2)若要获得已知序列的抗病基因，可采用_________或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用_____________，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中______，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。 (3)原生质体在培养过程中，只有重新形成___________后，才可进行有丝分裂，多次分裂形成的小细胞团可通过____________或器官发生的途径再生稙株。答案：(二)(1)过滤除菌 染色法，渗透吸水失水 (2)化学合成 两种限制性核酸内切酶 扩增 (3)细胞壁 体细胞胚发生