2013人教版选修三1 2基因工程基本操作程序课件无忧.pdfVIP

学习导航 1.掌握目的 获取的常见方法。 [难点] 2.学会 表达载体构建的方法和要求。 [重点] 3.理解目的 导入受体细胞的具体过程。 4.掌握目的 与鉴定的具体操作。 [要点] 新知初探思维启动 一、目的 的获取 1..从 文库中获取目的 将含有某种生物的不同 的DN 段 导入受体菌的群体中 ，各个受体菌分别 含有这种生物不同的 ，称为 文库。 文库包括两种： 组 文库，即包 部分 含一种生物所有 的文库； 文库,即只包含一种生物的一部分 的文库， 如cDNA文库。 2.利用PCR技术扩增目的 (1)PCR的含义：是一项在生物体外 特定DN 段的核酸合成技术。 (2)目的：短时间内大量扩增目的 。 (3)原理： DNA双链 。 (4)过程： DNA解链为单链 第 一 步 ： 加 热 至 90 ～ 95℃, 55～60 ; 第二步：冷却至 ℃，引物与两条 单链DNA相应互补序列结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合 酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。 如此重复循环多次。 (5)特点：指数形式扩增。 想 1．PCR过程中，需要解旋酶吗？所需要的 DNA聚合酶应具有什么特点？ 【提示】 PCR过程中，DNA双链解开是在 高温下完成的，不需要解旋酶；由于PCR过 程温度较高，所以需要能耐高温的DNA聚合 酶。 3.用化学方法人工合成 小 如果 比较 ,核苷酸序列又已知,也可以 通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 二、 表达载体的构建 表达载体的组成：必须有启动子、 目的 、终止子以及标记 等。 三、将目的 导入受体细胞 1..转化 目的 进入受体细胞内，并且在受体 细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 2.常用的导入方法 (1)将目的 导入植物细胞：采用最多的方 法是 农杆菌 转化法，其次还有 枪法 和花粉管通道法。 (2)将目的 导入动物细胞：最常用的方法 是 显微注射 技术。此方法的受体细胞多 是 卵 。 (3)将目的 导入微生物细胞的方法： ①用 Ca2＋ 处理细胞，使细胞处于能吸收 周围环境中DNA分子的生物状态,这种细胞 称为感受态 细胞。 ②将重组表达载体DNA分子与感受态细胞混 合，在一定温度下完成转化过程。 想 2 ．从细胞器的功能上分析，若通过 工 程生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 【提示】 不可以，糖蛋白上的糖链是在内 质网和高尔基体上加工完成的，而内质网和 高尔基体存在于真核细胞中，大肠杆菌是原 核生物，细胞中不含有这两种细胞器。 四、目的 的检测与鉴定 1..首先要检测转 生物的DNA上是否插 目的 DNA分子 杂 入 了