实验五小鼠初级精母细胞染色体畸变试验.pptxVIP

实验五小鼠初级精母细胞染色体畸变试验;实验五 小鼠初级精母细胞染色体畸变试验;目的;原 理;仪器和器械;试剂;试剂;试剂;试验设计;试验设计;接触途经 与实际接触途经一致或接近，可一次接触，也可每天接触一次，连续5天的方法。 取样时间 各组均于第一次接触后第12～14天将动物处死采样。 ;操作步骤;3、低渗 用眼科镊撕开睾丸被膜，轻轻分离曲细精管，加低渗液10mL，用滴管吹打混悬曲细精管，室温下低渗20～40min（低渗时间依室温条件而定）。 4、固定 仔细吸净低渗液，加固定液10mL，固定20min。必要时可存放在冰箱中过夜，但软化前应将固定液吸掉，再加入新鲜固定液，固定10min。;5、软化 吸净固定液，加60％冰醋酸2mL，滴管吹打至不透光，立即加入4mL固定液，用滴管打匀，移入离心管，以1 000r/ min离心10min。 6、制片 弃去大部分上清液，留下约0.5～1mL，充分打匀制成细胞悬液。将细胞悬液均匀地滴于冰水玻片上，轻吹细胞悬液扩散平铺于玻片上。每个睾丸制片2～3张。空气干燥或微热烘干。;;7、染色 将制备好的标本片放入Giemsa应用液中染色20～30min。立即用蒸馏水或磷酸盐缓冲液冲洗。晾干。 8、读片 在低倍镜下按一定顺序寻找背景清晰、分散良好、染色体收缩适中的中期分裂相细胞，再在油镜下选取邻近无游离染色体或中期相的细胞进行观察。;9．观察 每只动物分析100个中期分裂相细胞。 （1） 裂隙、断片、缺失、微小体、环状染色体、整倍体和非整倍体改变等。 （2）相互易位 涉及非同源染色体间末端断片的交换，需要两次断裂和修复。 （3）X-Y和常染色体的单价体 ;统计学方法：受试样品组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等分别按X2检验或Kastenbaum 和Bowman所述方法进行统计分析。阳性：受试样品组染色体畸变率与阴性对照组相比，统计学意义上有显著性差异，并有明显的剂量—反应关系或在一个受试样品组出现染色体细胞畸变数明显增高。 若统计学上差异有显著性，但无剂量—反应关系，则须进行重复试验，结果能重复者可确定为阳性。;;感谢您的欣赏