生物选修三知识点总结.pdfVIP

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹 专题 1 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA 重组和转基因技术， 赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程 是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的，又叫做 DNA 重组技术。 （一）基因工程的基本工具 1. “分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位 的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2. “分子缝合针”——DNA 连接酶 (1)两种 DNA 连接酶（E ·coliDNA 连接酶和 T DNA 连接酶）的比较： 4- ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E ·coliDNA 连接酶来源于 T 噬菌体，只能将双链 DNA 片段互补的黏性末端之间 4 的磷酸二酯键连接起来；而T DNA 连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较 4 低。 (2)与 DNA 聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端， 形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端，形成磷酸二酯键。 3. “分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源 DNA 片段插入。 ③具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具 有自我复制能力的双链环状 DNA 分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转 录法_和化学合成法_。 3.PCR 技术扩增目的基因 （1）原理：DNA 双链复制 （2）过程：第一步：加热至 90～95℃DNA 解链；第二步：冷却到 55～60℃，引物结合到互 补 DNA 链；第三步：加热至 70～75℃，热稳定 DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使 目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使 目的基因能够表达 和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA 片段，位于基因的首端，是RNA 聚合酶识别和结合 的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA 片段 ，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有 目的基因，从而将含有 目的基因的 细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_ 宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。——《洪应明》 我尽一杯，与君发三愿：一愿世清平，二愿身强健，三愿临老头，数与君相见。——《白居易》 1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞