实验3：革兰氏染.pptxVIP

实验3：革兰氏染第1页/共16页 【菌种】齿垢【试剂】生理盐水、革兰染液【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、牙签、吸水纸、 显微镜等【方法】1、细菌涂片标本的制片 2、革兰染液染色 3、油镜下观察结果 一、革兰染色法由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。第2页/共16页 器具：接种环（上）和接种针（下） 柄约22cm2—5mm绝缘柄约7.5cm金属柄约14.5cm5—8cm安装环(针)的螺口(约8mm)细菌涂片的制备第3页/共16页 操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）Aseptic area10-20cm外焰焰芯内焰第4页/共16页 菌液采取法细菌涂片的制备第5页/共16页 细菌涂片的制备 一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定【操作步骤】第6页/共16页 固定的目的：使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固；可改变菌体对染料的通透性；加热固定可杀死细菌，比较安全。 第7页/共16页 结晶紫 1’ 碘液 1’ 95% 乙醇 30” 复红 1’ 冲洗 滤纸干燥 油镜观察冲洗冲洗冲洗二、革兰染液染色初染媒染脱色复染【操作步骤】第8页/共16页 紫色（G＋）革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色甲菌乙菌初染结晶紫媒染碘液脱色乙醇复染稀释复红紫色（G＋）红色（G-）革兰氏染色步骤示意图第9页/共16页 【结果】细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌；而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；阳性菌——紫色 阴性菌——红色第10页/共16页 【革兰氏染色法的原理 】 1、细胞壁通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说第11页/共16页 通透性学说G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。第12页/共16页 等电点学说G+菌等电点（pI2~3）G-菌等电点（pI4~5） 在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。第13页/共16页 化学学说G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色第14页/共16页 注 意 事 项涂片的厚度。固定的程度。染色的时间控制：一一半一。冲洗的方法，不要对着涂片区。95% 乙醇脱色时间。第15页/共16页 感谢您的欣赏第16页/共16页