实验二细菌革兰氏染色.pptxVIP

实验二细菌革兰氏染色第1页/共15页 实验二细菌革兰氏染色第2页/共15页 一、实验目的学习微生物制片、染色的基本技术掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术进一步观察细菌的基本形态第3页/共15页 C.Gram（革兰）于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。二、实验原理第4页/共15页 革兰氏染色1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色第5页/共15页 第6页/共15页 三、实验材料1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S）2、染料：结晶紫、复红、碘液等3、材料：95%酒精等第7页/共15页 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—脱色—水洗—复染—水洗—干燥—镜检四、实验方法菌悬液涂片干燥滴加无菌水固定取菌苔涂片第8页/共15页 Smear preparation 第9页/共15页 Heat fixing第10页/共15页 crystal violet stain wash with water Staining第11页/共15页 Counterstain with Safranin 第12页/共15页 第13页/共15页 注意事项：（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革 兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。（4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。第14页/共15页 感谢您的欣赏第15页/共15页