实验一试剂的配制.pptxVIP

实验一试剂的配制;实验一：LB固体/液体培养基及质粒提取试剂的配制;一、实验目的;二、实验仪器;电子天平;pH酸度计;磁力搅拌器（配搅拌子）;TOMY SS-325/245自动蒸汽灭菌锅;LB液体培养基 25ml/2瓶+50mL/3瓶 LB固体培养基（150ml/2瓶）——每150ml液体培养基中加2.25g琼脂 溶液Ⅰ（pH8.0，100ml） 0.4mol/L NaOH（100ml） 2％SDS（100ml） 溶液Ⅲ（pH4.8，100ml） 70％乙醇（100ml） 50×TAE（200ml）;（1） LB液体培养基 将胰蛋白胨（typtone） 10g 酵母提取物（yeast extract）5g 氯化钠 10g 完全溶解在950mL去离子水中，用NaOH调节pH至7.0，加入去离子水至总体积为1L，121℃湿热灭菌20min。冷却后4℃保存备用。 （2） 固体LB培养基：每升LB培养基中加15g琼脂;3 溶液Ⅰ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris·HCl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(pH8.0) 称量→溶解→调节pH值→定容→灭菌 4 溶液Ⅱ 0.4mol/L NaOH 2%SDS 用前等体积混合。 称量→溶解→定容 5 溶液Ⅲ (pH4.8) 5mol/L 乙酸钾 60mL 冰乙酸 11.5mL 水 28.5mL;6 70%乙醇：放置于－20℃冰箱保存，用后即放回。 7 胰RNA酶 将RNA酶溶于10mmol/L Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/L NaCl中，配成10mg/mL浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，保存于－20℃。 8 平衡酚(pH8.0) (购于申能博彩公司);9. 50×TAE（500mL） 121g Tris碱 28.55mL 冰乙酸 50mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0);四、试剂灭菌;实验课20人每班 试剂配制时： 25mL LB液体培养基/100mL锥形瓶，4瓶/10人 溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ，1套/10人 50×TAE，500mL/30人;感谢您的欣赏