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口腔生物学实验教程;提要：口腔生物学实验教程是针对口腔生物学理论课设计的实验指导内容。其教学目的是让学生通过实验，掌握基本的口腔生物学研究技术和方法，加深对理论课所学知识的理解，培养学生对口腔医学基础研究的兴趣，了解基本的科研设计思路，启发学生的科研思维。 ;内容目录;第三节 口腔疾病分子生物学 实验九 以釉原蛋白基因进行性别鉴定 第四节 骨组织生物学和口腔细胞培养 实验十 成骨细胞的分离培养 实验十一 成骨细胞的分离培养 实验十二 MTT法检测细胞活性 实验十三 肿瘤细胞迁移实验（细胞划痕法） ;第一节 口腔微生物学实验;实验一 菌斑的采集、染色和观察、分类;实验方法：; ①龈沟内采集法 ②牙周袋内采集法 ;刚果红负性染色方法：;实验结果与分析：;实验二 变异链球菌的分离和鉴定;主要实验设备和器材、试剂等： 厌氧培养装置如简易厌氧袋、厌氧罐、厌氧培养箱或厌氧手套箱均可；普通孵箱，旋涡混合器，微量振荡器，和普通光学显微镜。 可调式移液器、加样头，小试管，三角形推棒，接种环、酒精灯，载玻片，无菌棉签，96孔反应板，EP管；口腔检查用口镜，镊子，检查盘，无菌纱球，无菌探针和龈上锄形洁治器。 革兰染色试剂，系列生化基质和指示剂（包括甘露醇、山梨醇、菊糖、精氨酸试剂、七叶苷水解试剂）。 变异链球菌ATCC25175悬液。 MS琼脂、BHI琼脂培养基、巯基乙醇酸盐转送液，0.2mol/L、pH 7.0～ 的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)等。;实验方法：变异链球菌群细菌的分离和表型鉴定;革兰染色步骤：;表型鉴定——（1）菌落特征观察;表型鉴定——（2）菌细胞形态和染色特征观察 ;生化鉴定：;生化鉴定——反应板微量快速生化实验名称、试剂及结果：;反应板微量快速生化实验： 利用细菌产生的预成酶（胞外酶），在37℃普通孵箱中与生化试剂基质产生特异的酶反应，通过各种指示剂或特殊的显色产物即可在4小时～24小时观察到结果。反应板微量快速生化实验的生化鉴定系统包括30个生化实验基质与相关指示剂、磷酸盐缓冲液（PBS）、细菌标准浊度管以及8个鉴定系列,可根据细菌的形态、染色性及耐氧实验结果选择不同的系列生化基质进行鉴定。这8个鉴定系列是： ①革兰阳性厌氧球菌 ②革兰阴性厌氧球菌 ③革兰阳性无芽胞厌氧杆菌 ④革兰阴性无芽胞厌氧杆菌：a.不产黑色素的革兰阴性厌氧短杆菌； b.产黑色素的革兰阴性厌氧短杆菌；c.革兰阴性厌氧梭状或长杆菌 ⑤革兰阴性弯曲菌 ⑥梭菌属 ⑦变异链球菌和其他口腔链球菌 ⑧微需氧的革兰阴性厌氧杆菌 ;菌种鉴定——变异链球菌群细菌的鉴别：;实验注意事项： ;实验三 细菌代谢酸的测定;实验方法：;实验结果分析： 结果计算： 培养液中各组分保留时间与标准酸图谱比较定性，按下式计算： C有机酸 = ;实验四 细菌细胞外葡聚糖的测定;实验主要设备和器材： 蒽酮试剂 称取200mg蒽酮溶解于100ml浓硫酸中搅拌溶解。4℃冰箱可保存2～3周。 葡聚糖标准储存液 称取1.0g葡聚糖，溶于100ml水中制成储存液。使用时吸取1.0ml稀释至100ml，储存于4℃冰箱中。 分光光度计，离心机，10ml试管，恒温水浴箱，水浴锅及吸管，移液器，氢氧化钠等。;实验方法：;2. 样品测定 取样品1.0ml(质量浓度在20μg/L～40μg/L为宜)，加蒽酮试剂3ml，95℃水浴煮沸6分钟，冷却后测其625nm处的OD值，根据标准曲线及稀释倍数计算样品中葡聚糖的含量。;实验五 菌斑中pH值的测定;1. 电极接触法 是活体菌斑pH检测法，即手持微电极测定菌斑pH的方法。 （1）用注射器吸取1ml标准pH溶液，滴入电极敏感端部位，校正pH计。 （2）受试者2天不漱口刷牙，测试前2小时不进食。 （3）用棉卷隔湿并用气枪吹干测试部位。 （4）测定“静态”pH：手持微电极置于原位的菌斑表面，待离子计数稳定时记录pH值。每一时间点测试受试者同一颗牙的上下左右4个位点，取其平均值即为菌斑原位pH值，且4个位点在1分钟内完成测试。 （5）测定动态pH：受试者可先测定静态PH