全自动生化分析仪的常用检测方法.pptVIP

吸光系数法 吸光系数法又称绝对法，是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式A＝Kbc进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长 处的吸光系数 或 ,并在相同条件下测量样品溶液的吸光度A，则其浓度为： 或 第三十页，共六十六页，2022年，8月28日 内容 一 概述 二 基本原理 终点法 三 检测方法 固定时间法 连续监测法 第三十一页，共六十六页，2022年，8月28日 终点法 终点法——通过检测终点吸光度的改变大小来求出被测物含量。 何为终点？如何判断？ 通常在反应终点附近连续选择两个吸光度值，求其平均值，根据两点的差值来判断反应终点。 第三十二页，共六十六页，2022年，8月28日 终点法 终点时间的确认： 一、根据时间-吸光度曲线 如:Trinder反应测尿酸，反应曲线上3-5分钟 时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反应终点。 二、根据被测物反应终点，结合干扰物的反应 情况来确定 如:溴甲酚绿法测血清白蛋白 第三十三页，共六十六页，2022年，8月28日 分类 终点法： 一点终点法 二点终点法 免疫比浊法 双波长法 第三十四页，共六十六页，2022年，8月28日 一点终点法 一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。 通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。 第三十五页，共六十六页，2022年，8月28日 一点终点法的设置： 以R和S混合之前的空气空白、水空 白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线通过零点且成直线，对于反应速度快的多用。 如：GLU TG CH等 第三十六页，共六十六页，2022年，8月28日 * * Al T （时间） A S+R (吸光度） 一点终点法反应曲线 第三十七页，共六十六页，2022年，8月28日 计算公式： C=(Am-Ab)*K Am----终点读数点的吸光度 Ab----试剂空白吸光度 K----校正系数 第三十八页，共六十六页，2022年，8月28日 二点终点法 第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度Am，经过一定时间后反应达终点后测 第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计 算结果。 第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。 第三十九页，共六十六页，2022年，8月28日 * * An T A R2 Am S+R1 (吸光度） （时间） 两点终点 Ax= 样本空白 An - k0 Am （体积校正因子）k0 = Sv+Rl Sv+R1+R2 第四十页，共六十六页，2022年，8月28日 两点终点法 计算公式： C=(An-K0*Am)*K K0---体积校正因子 K0=(Sv+R1)/(Sv+R1+R2) 第四十一页，共六十六页，2022年，8月28日 免疫比浊法 通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的 方法： 散射比浊：特定蛋白分析仪 透射比浊：自动生化分析仪 通常作两点终点法分析，多采用多点校准。 应用：用Ab测定Ag（主要为微量蛋白：IG、 C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等），要求Ab 过量，此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加 而递增，光散/透射射强度与抗原量成正比。 第四十二页，共六十六页，2022年，8