174例早期肺腺癌患者EGFR基因突变检测和临床病理特征分析.docx

? ? 174例早期肺腺癌患者EGFR基因突变检测和临床病理特征分析 ? ? 闫琛 徐小艳 徐宪伟 杨玉伦 杨金花 1 河南中医药大学第五临床医学院郑州人民医院病理科，郑州 450000；2河南中医药大学第五临床医学院郑州人民医院胸外科，郑州 450000；3中国肺癌防治联盟-郑州人民医院肺结节诊治分中心，郑州 450000 肺癌是临床上极为常见的恶性肿瘤之一，发病率与病死率都很高，严重威胁着人类的健康［1-2］。腺癌是常见的肺癌病理亚型，约占40%，由于其临床症状较为隐匿，发现时多为晚期［3-4］。近年来，随着肺癌筛查的普及和影像学技术的不断更新，早期肺腺癌的检出率得到了明显提高［5-6］。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因的突变不仅参与了癌细胞的分化增殖及新生血管的生成，还与癌细胞的侵袭和转移有关，更直接影响到相关靶向药物的选择及疗效，在肺腺癌的发生发展、治疗过程及预后判断中均起着至关重要的作用［7-8］。因此研究不同时期的肺腺癌组织中EGFR基因的突变情况就显得尤为重要，以往的报道多集中在晚期肺腺癌组织，对早期肺腺癌组织中EGFR基因的突变情况的研究较少。本研究检测了郑州人民医院54例原位肺腺癌和120例微浸润肺腺癌组织中EGFR基因的突变情况，并收集相关临床资料，回顾性研究了早期肺腺癌中EGFR基因突变的特点及其与临床病理特征的关系，现将研究结果总结如下。 资料与方法 1、临床资料 选择2019年1月至2020年12月郑州人民医院收治的54例原位肺腺癌患者和120例微浸润肺腺癌患者作为研究对象，其中男性54例，女性120例，年龄25～79岁，平均年龄53.8岁，年龄≥60岁患者72例，年龄＜60岁患者102例。所有患者的原发病灶均有病理诊断结果支持和完整的胸部影像学资料，且均未接受放化疗。本研究已经通过郑州人民医院伦理委员会的批准，入组患者均知情、同意，入组均为自愿，并按照要求在知情同意书上签字。 2、纳入与排除标准［9-11］ （1）纳入标准：①对入选病例给予临床诊断及病理学检查，诊断结果与国际非小细胞肺癌（NSCLC）临床诊断标准相符；②病历资料完整；③患者具有较好依从性，能够接受定期随访［12］。（2）排除标准：①伴随严重器官疾病以及肝肾功能不全者；②认知功能障碍及智力障碍患者；③临床资料不全者；④肺外存在原发性肿瘤患者；⑤存在严重感染及有心脏病史患者；⑥胃溃疡患者；⑦存在药物过敏史患者；⑧妊娠期及哺乳期妇女。 3、方法 3.1、病理类型诊断所有患者均做过外科手术，术后组织送病理科以明确病理类型。参照2015世界卫生组织（WHO）病理分类系统进行病理分型诊断［13］，由2位高年资病理医师对每例标本的病理诊断进行复核，并确定需要进行分子检测的标本中肿瘤百分比≥10%。 3.2、标本采集与DNA提取切片前后用75%乙醇消毒蜡块、刀片前后、刀片座及镊子，防止交叉污染；切片厚度5μm，数量5～10张，装入1.5 ml EP管中。DNA提取：采用AmoyDx-FFPE DNA提取试剂盒，按照试剂盒说明书进行DNA提取，测定DNA的浓度和纯度，浓度≥2 ng/μl，纯度为1.8≤A260/A280≤2.0视为合格。 3.3、扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应（amplification refractory mutation system PCR，ARMS-PCR）方法检测EGFR基因突变严格按照厦门艾德人类EGFR基因突变检测试剂盒说明书进行操作，将提取好的DNA稀释至2 ng/μl，将42.3μl稀释过的DNA和2.7μl Taq酶混合，分别取5.0μl加入到已经预先分装好反应液的8联管中，瞬时离心，用ABI7500荧光定量PCR仪进行检测，反应条件为：第一阶段，95℃预变性5 min，1个循环；第二阶段，95℃25 s，64℃20 s，72℃20 s，共15个循环；第三阶段，93℃25 s，60℃35 s，72℃20 s，共31个循环。在第三阶段60℃时收集FAM和VIC信号，执行实时PCR，按照判读标准判读结果。检测结果由2位专业人员判读，如果判读结果不一致，再由第3位人员分析做出最终的决定。 4、统计学分析 采用SPSS 22.0软件进行统计学分析，EGFR基因的突变率与临床病理特征的关系采用χ2检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。 结 果 1、早期肺腺癌组织中EGFR基因的突变率 174例早期肺腺癌组织中有102例出现了EGFR基因突变，总体突变率为58.6%，其中18外显子突变5例，占4.9%；19外显子突变28例，占27.5%；20外显子突变3例，占2.9%；21外显子突变66例，占64.7%。3例20外显子的突变中1例为插入突变，2例