15种水产动物致病菌生长特性及形态特征研究.docx

? ? 15种水产动物致病菌生长特性及形态特征研究 ? ? 徐佩，艾克特，周静文，庹锐，万晶 (长江大学动物科学学院，湖北 荆州 434020) 杨代勤，许巧情 (长江大学动物科学学院，湖北荆州434020；湖北淡水健康养殖协同创新中心，湖北武汉434070) ? 15种水产动物致病菌生长特性及形态特征研究 徐佩，艾克特，周静文，庹锐，万晶 (长江大学动物科学学院，湖北 荆州 434020) 杨代勤，许巧情 (长江大学动物科学学院，湖北荆州434020；湖北淡水健康养殖协同创新中心，湖北武汉434070) [Summary]采用平板培养及革兰氏染色镜检，对15种水产动物致病菌生长特性及形态特征进行了研究。结果表明，鮰爱德华氏菌只在TSA培养基上能正常生长，而且生长非常缓慢；腐败希瓦杆菌B16在shieh培养基上能正常生长；其余细菌均能在LB培养基上生长。这些致病菌在形态上可分为3类：一类为球状菌，包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、表皮葡萄球菌和溶壁微球菌；第二类为杆状菌，包括枯草杆菌、嗜水气单胞菌B11、鮰爱德华氏菌、迟钝爱德华氏菌、肺炎克雷伯菌、腐败希瓦杆菌B16、变形假单胞菌、荧光假单胞菌和大肠杆菌；第三类为弧状菌，包括副溶血弧菌和河流弧菌。 [Key]致病菌；革兰氏染色；细菌形态 细菌性疾病是鱼类中最为常见而且危害较大的一类疾病。随着养殖事业的发展，养鱼规模不断扩大，以及密养、精养技术的推广，细菌性疾病也在不断地暴发流行。如嗜水气单胞菌能广泛引起淡水鱼类细菌性败血症( 溶血性腹水病)，还可引起鳖的红底板病、穿孔病、出血性肠道坏死症、疖疮病以及青蛙的红腿病等[1]；河流弧菌可使鲤科鱼类患出血性败血症[2]；荧光假单胞菌可使以草鱼为主的多种淡水鱼患赤皮病[3]；迟钝爱德华氏菌可使鳗鲡、罗非鱼等海淡水鱼患红疫病爱德华氏病，也能引起池养鳝鱼的“红病”和渠道鲇鱼的“气肿性腐烂病”[4]；鮰爱德华氏菌可使斑点叉尾鮰等患肠道败血症[5]；无乳链球菌可使多种鱼类患链球菌病[6]；副溶血弧菌会引起对虾的红体病[7]；肺炎克雷伯菌是白鲢鳃丝、鳃耙溃烂病的致病菌，且该菌为强毒株等[8]。这些致病菌严重影响渔业的发展，造成了巨大的经济损失。本研究对15种常见的水产动物致病菌的形态特征进行了染色镜检观察，探讨了其生长特性，以期为水产动物细菌性疾病的快速鉴定提供参考。 1材料与方法 1.1材料 无乳链球菌、溶壁微球菌和鮰爱德华氏菌3种细菌由中国科学院水生生物研究所李爱华研究员惠赠，迟钝爱德华氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、枯草杆菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、腐败希瓦杆菌B16、河流弧菌、嗜水气单胞菌B11、变形假单胞菌、荧光假单胞菌和大肠杆菌等购自上海北诺生物科技有限公司。 1.2方法 将金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、溶壁微球菌、迟钝爱德华氏菌、副溶血弧菌、河流弧菌、表皮葡萄球菌、嗜水气单胞菌B11、枯草杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、变形假单胞菌、荧光假单胞菌、鮰爱德华氏菌、腐败希瓦杆菌等细菌的菌株在无菌的环境中分别接种到LB、TSA、sheih琼脂平板上，在37℃或28℃的培养箱里培养12～24h，观察菌株的生长情况。 选取在37℃或28℃的培养箱里培养12～24h后具有隆起、光滑、湿润、圆形的菌落，用划线的方式接种于LB、shieh或TSA琼脂平板上，置 37℃或28℃的培养箱里培养18～24h，保存在4℃的环境中备用。将所培养的细菌分别挑取单克隆进行革兰氏染色后再镜检观察其形态特征。 2结果与分析 金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、溶壁微球菌、枯草杆菌和表皮葡萄球菌均能在LB培养基上正常生长。金黄色葡萄球菌的菌落呈现金黄色，圆形、光滑、湿润，针尖或米粒大；无乳链球菌在营养培养基上生长缓慢，菌落较小，均为白色圆形、表面润滑光滑、微隆起、边缘整齐；表皮葡萄球菌的菌落呈现淡黄色，圆形、光滑，有点浑浊；溶壁微球菌、枯草杆菌、肺炎克雷伯菌、变形假单胞菌、DE3、腐败希瓦杆菌的菌落圆形，表面光滑，微隆起(图1)。 图1　5种革兰氏阳性致病菌在培养基上的生长形态 在LB培养基上能正常生长的革兰氏阴性致病菌有肺炎克雷伯菌、河流弧菌、嗜水气单胞菌B11、迟钝爱德华氏菌、副溶血弧菌、变形假单胞菌、荧光假单胞菌和大肠杆菌。 鮰爱德华氏菌最佳的培养基TSA培养基，腐败希瓦杆菌B16最佳的培养基为Shieh培养基。嗜水气单胞菌在普通营养琼脂培养基上生长良好，形成边缘整齐、表面湿润、隆起、光滑、半透明、灰白色至淡黄色的圆形菌落；迟钝爱德华氏菌在普通营养琼脂上呈圆形光滑、较透明或半透明、边缘整齐、无色或浅灰白色、稍隆起、直径多在0.5mm(培养48h后多在1.2mm左右)；副溶血弧菌在浓度大的地方, 菌落边缘不齐, 出现锯齿状, 单个菌落圆形、隆起, 表面光滑湿润, 稍