体外受精和早期胚胎发育PPT课件.pptx

试管动物技术; 意义（以良种牛的繁育为例）;意义;一、体外受精;（一）卵母细胞的采集和培养;（一）卵母细胞的采集和培养;（一）卵母细胞的采集和培养 1.活体卵巢上采集 超排处理：用促性腺激素处理，使其排出更多 的卵子，然后可 A:从输卵管中冲取卵子。 B:借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等工具 直接采集从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。;2.屠宰后卵巢上采集 无菌采集，放入30～39℃灭菌生理盐水，6h内带回实验室。 （1）卵巢表面卵泡卵母细胞的获得 采集方法3种。 ①抽吸法：用注射器配上12或18号针头，以PBS为抽卵 液，从卵巢表面抽吸卵泡。 ②切割法：用刀片反复切割卵泡，然后用PBS（添加5% 的犊牛血清）沿切口反复冲洗卵巢，回收。 ③剥离法：剥离突出于卵巢表面的卵泡，放在卵母细 胞培养液中，然后用针刺破眼科剪剪破卵 泡，回收。 （2）卵巢内卵母细胞的获得 用单面刀片或一组特制刀片对卵巢深层组织进行切割。可获得更多的COC。;（二）精子的采集和获能;2.精子的获能处理;（三）体外受精;二、胚胎的早期培养;不同胚胎移植的时间：;在保温瓶中存放 （生理盐水）; 在选择卵母细胞时，无论用哪种方法采集到的卵母细胞，外围一般都应该有数层卵丘细胞所包围，形成一个叫卵丘复合体的结构（COC）。这种结构对于卵母细胞在体外条件下的成熟是十分重要的。在对家畜体外受精的操作中，一般把未成熟的卵母细胞分成A、B、C、D四级。对A级卵母细胞要求是有3层以上的卵丘细胞包围，卵母细胞的细胞质均匀；B级是少于3层卵丘细胞，但卵母细胞质要均匀；C级为没有卵丘细胞包围的卵母细胞，又称裸卵，培养效果很差；D级是退化或死亡的卵母细胞，应淘汰。A、B两类卵母细胞培养效果较好。 ; 发情期牛输卵管液中氨基多糖（GAG）是牛精子体内获能的主要物质。GAG可促进精子对钙离子的吸收，从而引发顶体反应。肝素是高度硫酸化的GAG。咖啡因能够增强夺素的诱导作用。 在精子获能过程，BSA可以降低精子顶体膜中胆固醇的浓度，有利于顶体反应。精子获能之后，BSA可促进其迅速透卵子。因此，BSA作为辅助成分广泛用于家畜精子的体外获能。