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新编免疫组化第1页/共114页 主要讲述内容：第一部分 免疫细胞化学的理论基础第二部分 免疫荧光细胞化学技术第三部分 免疫酶细胞化学技术第四部分 免疫电子显微镜技术第2页/共114页 第一部分 免疫细胞化学的理论基础 免疫细胞化学是免疫学与细胞化学相结合的一个分支学科，以免疫学的抗原抗体反应为其理论基础。第3页/共114页 第一节 抗原（antigen）一、抗原的概念 是一类在合适的条件下，能激发机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物质在体内和/或体外发生特异性结合反应的物质。抗原的性能：免疫原性 产生免疫应答 反应原性 产生特异性反应第4页/共114页 二、抗原决定簇 是与相应抗体或淋巴细胞抗原识别受体相结合的部位，是决定和控制抗原特异性的特殊化学基团。类型：功能性抗原决定簇 隐蔽性抗原决定簇 免疫优势决定簇 线性或连续性决定簇 构象决定簇或不连续性决定簇B 细胞所识别的是半抗原决定簇；T细胞所识别的是免疫原性决定簇或连续性决定簇。第5页/共114页 三、抗原的性质与种类（一）抗原的性质1、抗原的异物性 机体能对进入体内的异种、异体的大分子物质产生免疫应答。该物质与机体的种系关系愈远，其免疫原性愈强，机体的免疫反应也更强。自身抗原；自身抗体2、大分子胶体 作为抗原，分子愈大，其免疫原性愈强 3、抗原的特异性 各种抗原物质各有其特异的抗原决定簇，即一种抗体只能与相应的抗原起反应而不能与其它抗原反应。第6页/共114页 （二）抗原的种类方法 分类依据 种类单独存在时是否有免疫原性 半抗原和完全抗原抗原来源 外源性抗原和内源性抗原抗原与宿主关系 异种抗原，同种异体抗原，自身抗原B细胞产生抗体时是否需要T细胞辅助 胸腺依赖抗原，胸腺非依赖抗原化学物质 蛋白质，多糖，脂蛋白，脂多糖，糖蛋白， 核酸等物理状态 颗粒性抗原，可溶性抗原产生方式 天然抗原，人工合成抗原，基因工程抗原抗原特异性程度 特异性抗原，共同抗原完全抗原：同时具有免疫原性和反应原性的物质。不完全抗原或半抗原：无免疫原性。第7页/共114页 第二节 抗体（antibody）一、抗体的概念 机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答，B淋巴细胞活化、增殖、分化为浆细胞，由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白。二、抗体的性质和种类（一）抗体的一般性质 免疫球蛋白约等于抗体，分五类：IgG,IgM,IgA,IgD,IgE第8页/共114页 （二）免疫原性和分类特性 免疫球蛋白都是大分子蛋白质，具有免疫原性，课作为抗原。由于存在着轻链和重链，可变区和稳定区，因此，分子结构差异较大，免疫原性比较复杂。（三）抗体的种类1、根据抗体的途径或来源不同分为免疫抗体；天然抗体；自身抗体2、根据抗原抗体在试管内是否出现肉眼反应分为完全抗体；不完全抗体第9页/共114页 三、抗原与抗体反应 称为免疫学反应。在体内进行称为免疫反应；在体外称为血清学反应四、抗体形成的机制（一）免疫应答的产生1、感应阶段（识别及加工处理抗原阶段）2、反应阶段（淋巴细胞增殖分化阶段）3、效应阶段（发生免疫反应阶段）（二）影响抗体产生的因素1、抗原的质和量2、机体方面3、佐剂的增强免疫作用第10页/共114页 第三节 有关基本技术方法一、抗体的制备（一）抗体的制备方法 能制备出具有很高特异性和敏感性的高效价多克隆和单克隆抗体。第11页/共114页 1.多克隆抗体（血清抗体］：指机体接受抗原主动免疫或被动免疫后