DB33T 2408-2021甘薯茎腐病菌检疫鉴定方法.pdfVIP

ICS 65.020.20 CCS B 16 33 浙 江 省 地 方 标 准 DB33/T 2408—2021 甘薯茎腐病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Dickeya dadantii 2021 - 12 - 24 发布 2022 - 01 - 24 实施 浙江省市场监督管理局 发 布 前 言 本标准按GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求起草。 请注意本标准的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别专利的责任。 本标准由浙江省农业农村厅提出。 本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：浙江省植保检疫与农药管理总站、浙江大学、浙江省植物保护学会。 本标准主要起草人：楼兵干、李艳敏、沈肖玲、陆剑飞、施海萍、高其康、李国钧、张莉丽、李月 红、刘丽华、仇智灵、姚海峰、王荣洲。 甘薯茎腐病菌检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了术语与定义、缩略语、甘薯茎腐病菌PCR反应和实时荧光PCR反应体系的构成、试剂和 材料、器材与设备、操作步骤和结果判定。 本标准适用于甘薯根、茎、叶等植物材料甘薯茎腐病菌的检测。 2 规范性引用文件 本标准没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 甘薯茎腐病菌 the pathogen of stem and root rot of sweet potato 引起甘薯茎腐病的病原菌，属于细菌界（Bacteria）、变形菌门（Proteobacteria）、伽玛变形菌 纲（Gammaproteobacteria）、肠杆菌目（Enterobacterales）、果胶杆菌科（Pectobacteriaceae）、 狄克氏菌属（Dickeya）、达旦提狄克氏菌(Dickeya dadantii)。革兰氏阴性细菌，菌体短杆状，大小 约为2.36 μm × 0.40 μm，周生鞭毛，可在烟草上激发过敏性反应（HR）。 注：症状特征见附录A。 4 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 bp：碱基对（Base pair） CFU：菌落形成单位（Colony-Forming Unit） CTAB：溴代十六烷基三甲胺（Cetyltrimethylammonium bromide） DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid） dNTP：脱氧核苷三磷酸（Deoxyribonucleoside triphosphate） HR：过敏性反应(Hypersensitive Reaction) MALDI-TOF MS ：软电离高分辨飞行时间串联质谱仪（Matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry） NA：营养琼脂（Nutrient Agar） NGM：营养琼脂甘油培养基（Nutrient Agar Glycerol Media） PCR：聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction） RT-PCR：逆转录-聚合酶链式反应（Reverse transcription polymerase chain reaction） Taq：水生噬热杆菌（Thermus aquaticus） 5 方法原理 根据甘薯茎腐病的菌落形态特征、田间危害症状特征、分子生物学PCR或RT-PCR反应特征、蛋白质 指纹图谱特征和致病性测试结果等进行检测鉴定。 6 试剂或材料 6.1 75 %乙醇。 6.2 1%次氯酸