肝炎的分子诊断与临床应用.pptVIP

目 录 1、了解肝炎分子诊断 2、分子诊断在HBV中的临床应用 3、分子诊断在HCV中的临床应用 4、ADICON已开展的肝炎分子诊断项目 当前第1页\共有32页\编于星期五\11点 我国乙肝病毒感染率概况 当前第2页\共有32页\编于星期五\11点 《2006－2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划》显示，中国是乙型肝炎病毒感染和发病人数最多的国家，全国有6.9亿人曾感染过乙肝病毒，其中1.2亿人长期携带乙肝病毒。 　　目前全国慢性乙肝病人2000万人，每年死于与乙肝相关的肝病患者达28万例，发病率和死亡率都位居前三位。每年造成的直接经济损失约达3600亿元人民币。 我国乙肝病毒感染率概况 当前第3页\共有32页\编于星期五\11点 什么是分子诊断 在临床上应用核酸（DNA/RNA) 和分子生物学技术, 在基因水平诊断和监控疾病情况和疗效，评估疾病的检测方法。 当前第4页\共有32页\编于星期五\11点 分子技术在乙肝诊断与治疗中应用 HBV 分子诊断的 临床应用 高灵敏度 HBV DNA定量 HBV 感染监测 药物疗效检测 感染早期检测 HBV 基因分型 病情预后发展 检测 抗病毒药物效 果预测 P区耐药检测 抗药性监测 治疗药物选择 S 区变异 确定隐觅性病毒 变异 判断疫苗效果 判断肝炎预后 C区启动子变异 确定病毒变异 类型 判断治疗效果 确定治疗方案 当前第5页\共有32页\编于星期五\11点 高灵敏度乙肝DNA检测 高精度病毒载量检测系统（ COBAS AmpliPrep/Cobas TaqMan ） 当前第6页\共有32页\编于星期五\11点 高灵敏度乙肝DNA检测优势 定量PCR技术检测患者的血清HBVDNA含量，能更准确地反映病毒复制程度，对HBV相关疾病的诊断、治疗、判断预后意义重大。 QF-PCR是国内常用的定量检测血清HBVDNA水平的方法，COBAS 系统是美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于血清HBVDNA定量检测的方法。它具有灵敏度高，线性范围广，实时监控，重复性好，可检测A、B、C、D、E、F、G、前C区变异等多基因型DNA载量优点。 由于本QF-PCR试剂盒的线性范围为1.0x 103 copies／mL～1.0x 108 copies／mL，对于低于1.0 x 103 copies／mL标本的检测结果不能给出具体拷贝值，有存在漏检的可能。 而COBAS 系统线性范围为20-1.7×108 IU/mL，因此， COBAS 系统更能准确反映血清HBV DNA含量。 当前第7页\共有32页\编于星期五\11点 COBAS? AmpliPrep/COBAS? TaqMan? HBV Test, v2.0 COBAS? AmpliPrep/COBAS? TaqMan? HBV Test, v2.0 检测灵敏度 20 IU/mL 线性范围 20 – 1.7 x 108 IU/mL 检测基因型 A-H 检测样本量 650 mL Sample Type 血清或EDTA抗凝血浆 SFDA注册证 Q3 当前第8页\共有32页\编于星期五\11点 Cobas? 高灵敏度 乙肝：20 IU/mL 准确判断治疗起点/终点 线性范围 乙肝：20-1.7×108 IU/mL 极佳的重复性，结果可靠 正确指导抗病毒治疗 每批试剂均使用WHO标准品校准 保证定量结果的准确性 和可溯源性 每个样本使用同源性内标定量 避免结果不准确 采用AmpErase酶 减少交叉污染 目前在国内唯一满足治疗指南和专家共识的HBV DNA和 HCV RNA检测试剂 当前第9页\共有32页\编于星期五\11点 HBV DNA 监测的重要性 口服核苷（酸）类似物疗效评估 部分病毒学应答 60 – 2,000 IU/mL 加其他药物治疗 每3个月监测HBV DNA 开始治疗--- 基于 HBV DNA、 ALT水平和疾病发展阶段 治疗第12周评估是否存在原发性无应答 (较基线下降1 log) 治疗第24周评估 完全病毒学应答 60 IU/mL 继续治疗 每6个月监测HBV DNA 不充分病毒学应答 2,000 IU/mL 改用或加用更强药物 每6个月监测HBV DNA *Keefe, E. Clin Gastro Hepatology. 2007; (5):890-897. 抗病毒治疗应将HBV DNA降至尽可能低的浓度，理想是低于实时定量 PCR方法（灵敏度10-15 IU/mL）的最低检出限1 1. EASL HBV Guidelines. J Hepatology. 2009;50:277-242 当前第10页\共有32页\编于星期五\11