实验十黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识.docxVIP

实验十黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识 (一)目的要求学习提取精制和检识黄连中的小檗碱,通过实验要求： 1.掌握小檗碱的结构特点和理化性质。 熟悉浸渍法、盐析法、结晶法和薄层色谱法的基本操作过程及注意事项。 了解盐酸小檗碱的检识方法。 ( 二 ) 主 要 化 学 成 分 的 结 构 及 性 质 黄 连 为 毛 茛 科 植 物 黄 连CoptischinensisFranch.、三角叶黄连CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao、峨嵋野连 Coptisomeiensis(Chen)C.Y.Cheng 或云连 CoptisteetaWall.的根茎。黄连的根状茎含多种生物碱,主要为小檗碱(黄连素),约 5%~8%,其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等。叶含小檗碱 1.49%。 小檗碱(berberine):分子式(C20H18NO4) +, 分子量 336.37 。系季铵生物碱。游离小檗碱为黄色针状结晶( 乙醚),mp.145℃,能缓缓溶于冷水(1∶20),可溶于冷乙醇(1∶100),易溶于热水或热乙醇, 难溶于丙酮、 氯仿、 苯, 几乎不溶于石油醚。 盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl·2H2O),为黄色结晶,微溶于冷水(1∶500),易溶于沸水,几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗碱((C20H18NO4) 2·SO4·3H2O),溶于水(1∶30),溶于乙醇。重硫酸小檗碱(C20H18NO4·HSO4) 为黄色结晶或粉末,溶于水(1∶150),微溶于乙醚。 NOCH3OCH3OO+N+HOCH3OHOCH3OCH3CH3 小檗碱木兰碱(三)实验原理根据小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小,而小檗碱的硫酸盐水中溶解度较大。 因此,从植物原料中提取小檗碱时常用稀硫酸水溶液浸泡或渗漉 ,然后向提取液中加入 10%的食盐,在盐析的同时,也提供了氯离子,使其硫酸盐转变为氯化小檗碱(即盐酸小檗碱)而?1?7?1?7?1?7 出。 (四)实验内容 1.盐酸小檗碱的提取、精制略 2.盐酸小檗碱的检识(1)浓硝酸或漂白粉试验:取盐酸小檗碱少许,加 4ml 稀硫酸溶解,分置于两支试管中。一支试管滴加浓硝酸数滴,即显樱红色。另一支试管加少许漂白粉,也立即显樱红色。 丙酮试验:取盐酸小檗碱约 50mg,加蒸馏水 3ml 缓缓加热溶解后,加氢氧化钠试剂 2 滴,显橙色。溶液放冷后,加丙酮 4 滴振摇,即发生混浊。放置后析出黄色丙酮小檗碱沉淀。 没食子酸试验:取盐酸小檗碱约 20mg,置白瓷皿中,加硫酸 1ml 溶解后,加5%没食子酸的乙醇溶液 5 滴,置水浴上加热,即显翠绿色。 薄层色谱检识薄层板:中性氧化铝(软板)试样:自制盐酸小檗碱乙醇溶液对照品:盐酸小檗碱对照品乙醇溶液展开剂 :氯仿-甲醇(9∶1)显色:自然光下观察黄色斑点或紫外灯下观察荧光 (5)纸色谱检识支持剂 :新华层析滤纸(中速、20cm×7cm)试样:自制盐酸小檗碱乙醇溶液对照品 :盐酸小檗碱对照品乙醇溶液展开剂:正丁醇-醋酸-水(4∶1∶1)显色:紫外灯下观察荧光(五)实验说明及注意事项 1.浸泡黄连粗粉的硫酸水溶液,一般为 0.2%~0.3%为宜。若硫酸水溶液浓度过高,小檗碱可成为重硫酸小檗碱,其溶解度(1∶150)明显较硫酸小檗碱(1∶30) 小,从而影响提取效果。硫酸水溶液浸出效果与浸渍时间有关 ,有报道,浸渍 12 小时约可浸出小檗碱 80%,浸渍 24 小时,可浸出 92%。常规提取应浸渍多次,使小檗碱提取完全,本实验中只收集第一次浸出液。 进行盐析时,加入氯化钠的量,以提取液量的 10%(g/v)计算,即可达到析出盐酸小檗碱的目的。氯化钠的用量不可过多 ,否则溶液的相对密度增大,造成 ?1?7?1?7?1?7 出的盐酸小檗碱结晶呈悬浮状态难以下沉。盐析用的氯化 钠用市售的精制食盐,因粗制食盐混有较多泥沙等杂质,影响产品质量。 在精制盐酸小檗碱过程中,因盐酸小檗碱放冷极易析出结晶 ,所以加热煮沸后,应迅速抽滤或保温滤过,防止溶液在滤过过程中冷却,析出盐酸小檗碱结晶阻塞滤材,造成滤过困难,减低提取率。 本实验流程也适用于以三棵针、黄柏为原料提取小檗碱,但因其小檗碱含量较低,应加大药材量,以 150g 以上为宜。 (六)思考题 1.怎样从黄连中提取分离盐酸小檗碱原理是什么 2.试述小檗碱的检识方法。 3.用薄层色谱法检识小檗碱时,为什么常选用氧化铝为吸附剂如果选用硅胶作吸附剂,怎样操作才能达到较准确的结果。