L-肌肽的测定 高效液相色谱法.pdfVIP

ICS 71.100.70 CCS Y 42 T/CASME 中国中小商业企业协会 团体 标准 T/CASME XXX—2023 L-肌肽的测定 高效液相色谱法 Determination of L-creatine by high performance liquid chromatography （征求意见稿） 2023 - XX - XX 发布 2023 - XX - XX 实施 中国中小商业企业协会 发 布 T/CASME XXX—2023 L-肌肽的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了L-肌肽的高效液相色谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器和设备、溶液配制、试验 步骤、结果计算、精密度、检出限和定量限。 本文件适用于化妆品等中L-肌肽含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的L-肌肽经纯水超声提取，离心过滤后，与衍生试剂2,4-二硝基氟苯发生反应，采用高效液 相色谱（紫外检测器）测定，根据保留时间定性，外标法定量。 5 试剂和材料 水：除非另有说明，水均为GB/T 6682 规定的一级水。 乙腈：色谱纯。 三水乙酸钠：分析纯； 2,4-二硝基氟苯：纯度≥99.0％； 硼酸：分析纯。 硼砂：分析纯。 L-肌肽：纯度≥98％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。L-肌肽的英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量和结构式见附录A。 6 仪器和设备 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 分析天平：感量为0.01 g、0.001 g、0.000 1 g。 旋涡振荡器。 超声振荡器：工作频率53 kHz。 1 T/CASME XXX—2023 离心机：转速不小于4 000 r/min。 氮吹仪。 恒温水浴锅：控温精度±1 ℃。 微量移液器：0.5 L～10 L。 微孔滤膜：0.22 m、0.45 m。 7 溶液配制 乙酸钠溶液（0.075 mol/L） 称取6.152 2 g三水乙酸钠，加水定容至1 000 mL，溶解，经0.45 m微孔滤膜过滤。 硼酸溶液（0.2 mol/L） 称取12.366 g硼酸于烧杯中，加水溶解后定容至1 000 mL，摇匀。 硼砂溶液（0.05 mol/L） 称取19.068 g硼砂于烧杯中，加水溶解后定容至1 000 mL，摇匀。 硼酸-硼砂缓冲液 将硼酸溶液和硼砂溶液按体积比1：4混合配制而成。 L-肌肽标准储备液（1.0 mg/mL） 称取根据纯度折算相当于10 mg （精确至0.1 mg）L-肌肽标准品，加水溶解定容至10 mL，-18 ℃保 存，备用。 L-肌肽标准工作溶液 （0.01 mg/mL） 吸取L-肌肽标准储备液1.0 mL，加水定容至100 mL，现用现配。 L-肌肽标准溶液 （1 µg/mL） 移取L-肌肽标准工作溶液1.0 mL至10 mL容量瓶中，加入5 mL硼酸-硼砂缓冲液和2 L 2,4-二硝基 氟苯，于80 ℃±1