DB32_T 3205-2017饲料中雪腐镰刀菌烯醇（NIV）的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法.pdfVIP

ICS 65.120 B46 备案号： DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3205—2017 饲料中雪腐镰刀菌烯醇（NIV）的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 Determination of nivalenol (NIV) in feed--High performance liquid chromatography method with immunoaffinity column clean-up 2017 - 05 - 05 发布 2017 - 06 - 05 实施 江苏省质量技术监督局 发布 DB32/T 3205—2017 饲料中雪腐镰刀菌烯醇（NIV ）的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中雪腐镰刀菌烯醇检测的制样、免疫亲和柱净化和高效液相色谱检测方法。 本标准适用于饲料原料、配合饲料或混合饲料中的雪腐镰刀菌烯醇的检测。 本标准的检测限为2 µg/kg，定量限为10 µg/kg 。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1—2005 饲料采样。 3 原理 液相色谱系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。原理是根据被测样 品中各组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。被测样品与溶剂混合后在高压泵的作用下通过毛细 管进入色谱柱，样品在色谱柱中作定向迁移运动并和流动相发生互相作用，使多组份的样品逐渐分离为 单个组份，再通过检测器进行检测，通过对比与分析即可定性定量地鉴定样品中的各个未知组份。 4 试剂 本检测方法所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯，水为蒸馏水或相当的去离子水。 4.1 甲醇：HPLC 级。 4.2 乙腈：HPLC 级。 4.3 乙酸铵。 4.4 乙醇。 4.5 高效液相色谱流动相:甲醇-0.1%乙酸铵水溶液 （20:80, V/V）。 4.6 雪腐镰刀菌烯醇标准溶液:准确称取适量的雪腐镰刀菌烯醇标品，用甲醇配制成0.1 mg/ml 的标准 储备液，避光储存于4 ℃冰箱中，用于制备标准曲线。根据需要稀释成适当浓度的标准工作液。 5 设备 5.1 高效液相色谱装置:高效液相色谱仪；M1706 紫外检测器。 5.2 Mycosep®227 免疫亲和柱。 5.3 旋转蒸发仪。 6 分析步骤 6.1 样品 饲料原料、配合饲料或混合饲料。 6.2 样品制备 1 DB32/T 3205—2017 按GB/T 14699 1—2005 饲料采样取得试样800 g，四分法缩减至100 g，磨碎，并通过0.90 mm孔径 分子筛。 6.3 毒素提取 称取试样10.0 g 置于 150 mL 具塞锥形瓶中，加入30 mL 乙腈-水（84:16, V/V）振荡30 min ，过滤。 再加入30 mL 乙腈-水（84:16, V/V）振荡提取30 min，收集滤液至干净的容器中。 6.4 样品提取液的净化 移取上述滤液8 mL，过Mycosep®227免疫亲和柱进行净化。收集净化液4 mL于圆底烧瓶中，在旋 转蒸发仪上60 ℃蒸发至干。加入400