DB37_T 1678-2010饲料中三聚氰胺的快速测定 检测卡法.pdf

ICS 65. 120B 46DB37山 東东省地方标准DB 37/T料中三聚氰胺的快速测定检测卡法Rapid determination of melamine in feedsTest strip2010-10-19发布2010-11-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/ T 1678—2010目次前言II范围2规范性引用文件3原理4试剂和材料5仪器6试样的制备检测卡的验证7. 1阴性样品验证7. 2阳性样品验证，7. 3检测卡的综合评价8分析步骤8.1提取8.2样品检测9结果判定10结果确认与表述10.1呈现阳性反应的样品10.2呈现阴性反应的样品附录A（规范性附录）三聚氰胺检测卡判定示意图 DB37/ T 1678—2010前 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧善医局提出。本标准由畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料质量检验所。本标准起草人：季会荣、宫玲玲、孟凡胜、强莉、李斌II DB37/ T 1678—2010饲料中三聚氰胺的快速测定检测卡法1范围本标准规定了用检测卡快速测定饲料中三聚氰胺的方法。本标准适用于配合饲科、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和单一饲料，2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样S61OZ L/89试样制备NY/T 1372饲料中三聚氰胺的测定3原理将三聚氰胺和三聚氰胺抗体分别包被在检测卡纤维素膜的不同带区；滴加在膜条一端的试液在毛细管作用下渗移，与检测卡上的三聚氰胺和三聚氰胺抗体发生竞争抑制免疫反应，胶体金显色定性。t试剂和材料除非另有说明，仅使用分析纯试剂。水，GB/T6682，三级。4.1甲醇溶液：200ml甲醇加入800mL水，混勺。4.2提取液：0.1moL/L盐酸落液，量取盐酸0.83mL，加水至100mL。4.3氢氧化钠落液：1moL/L，称取氢氧化钠4.00g，加水至100mL4.4三聚氰胺标准储备液：准确称取50mg三聚氰胺标准品（含量98%），用甲醇溶液（4.1）落解并定容至50mL，该溶液浓度为1.0mg/ml。4℃冰箱中贮存，有效期3个月。4.5三聚氰胺标准工作液：准确移取1.00mL三聚氰胺标准储备液（4.4），用甲醇溶液（4.1）定容至100mL，该溶液浓度为10μg/mL。4C冰箱中贮存，有效期1个月4.6一次性滴管。4. 7三聚氰胺检测卡。不同品牌检测卡的组成略有差别。4.8三聚氰胺阴性样品：自已制备或经仪器确证的不含有三聚氰胺的样品。5仪器5.1天平：感量0.1mg DB37/ T 1678—20105.2离心机： 转速3 000r/min 以上。5.3离心管：10mL、1.5ml.。5.4移液枪：50μL、100μL、1000μL5.5凝涡混合器。6试样的制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，缩分至约200g，按照GB/T20195制备样品，过0.45mm孔径的分析筛，混匀备用。检测卡的验证7. 1阴性样品验证每一批次按5%的比例抽取检测卡，最少抽取一个，使用阴性样品（4.8）依检测卡说明书测定步媒做阴性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加倍随机抽取检测卡做阴性验证试验验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。7.2阳性样品验证称取阴性饲料样品（4.8）1g（精确至0.01g）于10mL离心管（5.3）中，按说明书标识的检测限（≤2.5mg/kg），用移液枪（5.4）移取三聚氰胺标准工作液（4.5）加入离心管内，充分混合，配制成含三聚氰胺的样品。每一批次按10%的比例抽取检测卡，最少抽取两个，使用该样品依检测卡说明书测定步骤做阳性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加借随机抽取检测卡做阳性验证试验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。7.3检测卡的综合评价在确认阴性验证试验和阳性验证试验同时符合时，该批次的检测卡方可使用，8分析步骤8.1提取称取饲料试样1g（精确至0.01g）于10mL离心管（5.3）中，加提取液（4.5）5.00mL，在凝涡混合器上混合2min或剧烈振荡5min后。过滤或离心5min。取适量滤液或上清液于1.5mL离心管（5.3)中，用氢氧化钠溶液（4.3）调pH至7~~8后，取100μL于1.5mL离心管（5.3)中，加100μL蒸馏水混匀备用，8.2样品检测检测卡（4.7）放置于水平台面上恢复至检测卡要求的温度后，取出检测卡进行检测，检测卡即开即用。用一次性滴管吸取试液（8.1），垂直滴加3~