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当归提取物的提取、纯化及生物活性测定 当归是一门辩证的植物，当归属植物（oliv.）可以滋润根部。 1 材料和方法 1.1 纤维素和酸钠的提取 当归先由“甘肃省药品研究院”鉴定合格, 后对当归进行提取, 去除不利于机体吸收的纤维素和鞣酸, 再对其分别用乙醇和水提取, 最后浓缩成褐色膏状液体。有效成分包括皂甙 (平均含量1.57 g/100 g) 、黄酮 (平均含量2.17 mg/100 g) 和多糖 (平均含量0.13 mg/g) 等。 1.2 实验动物、饲料 昆明种小鼠, SPF级, 由中国农业科学院兰州兽医研究所提供, 实验动物生产许可证号:SCXK (甘) 2010-0001, Wistar大鼠, SPF级, 由甘肃中医药大学科研实验中心提供, 实验动物生产许可证号:SCXK (甘) 2011-0001。实验动物饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供, 生产许可证号:SCXK (京) 2014-0010。饲养环境为屏障环境, 温度:22±1℃, 相对湿度:42%~45%。所有实验动物在试验前均适应性喂养3 d。 1.3 中毒试验方法 1.3.1 按量刑法实验 采用GB 15193.3-2014标准, 按限量法实验。当归提取物配制最大浓度为0.8 g/ml, 染毒剂量为16.0 g/kg·bw。 1.3.2 重复试验设计 采用GB 15193.4-2014标准, 用平板掺入法试验。首次试验设0.2、0.5、1.0、2.5和5.0 mg/皿5个剂量, 重复试验设0.008、0.04、0.2、1.0和5.0 mg/皿5个剂量, 2次实验均设立自发回变对照组、溶剂对照组 (无菌蒸馏水) 和阳性对照组。 1.3.3 环磷酰胺检测 采用GB 15193.5-2014标准, 设2.5、5.0和10.0 g/kg·bw 3个试验组, 另设阴性对照组 (蒸馏水) 和阳性对照组 (环磷酰胺40 mg/kg·bw) 。 1.3.4 丝裂霉素对大鼠体内的影响 采用GB15193.8-2014标准, 设2.5、5.0和10.0 g/kg·bw 3个试验组, 另设阴性对照组 (蒸馏水) 和阳性对照组 (丝裂霉素C2 mg/kg·bw) 。 1.3.5 分组及测定指标 采用GB 15193.14-2003标准, 设8.0、4.0、2.0 g/kg·bw 3个试验组, 另设阴性对照组 (蒸馏水) 及阳性对照组 (阿司匹林0.28 g/kg·bw) 。 2 结果 2.1 动物不良反应观察 1次灌胃16.0g/kg·bw当归提取物30min后雌雄动物均未出现不良反应, 连续观察14 d期间内动物未见明显中毒症状, 亦无死亡。依据急性毒性分级评价标准规定, 该受试物属实际无毒级。 2.2 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 试验重复2次, 2次试验各剂量组回变菌落数均未超过空白对照菌落数2倍, 亦无剂量-反应关系, 对鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102和TA15355株试验菌株, 在加与不加S时, 均无致突变作用。 2.3 小鼠红细胞微核试验结果 受试物各剂量组微核率与阴性对照组比较, 差异无统计学意义 (P0.05) , 而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较, 差异有统计学意义 (P0.01) , 该受试物哺乳动物红细胞微核试验结果阴性。 2.4 小鼠精母细胞染色体畸变试验结果 受试物各剂量组小鼠精母细胞染色体畸变发生率与阴性对照组比较, 差异无统计学意义 (P0.05) , 丝裂霉素阳性对照组与阴性对照组比较, 差异有统计学意义 (P0.01) , 该受试物小鼠精母细胞染色体畸变试验结果为阴性。 2.5 畸形试验 2.5.1 投资后孕鼠宫连胎体重、净增重变化 试验过程中各组动物生长正常, 8.0 g/kg·bw组孕鼠增重与阴性对照组比较, 差异有统计学意义 (P0.05) , 但无生物学意义;2.0和8.0 g/kg·bw组孕鼠子宫连胎体重分别与阴性对照组比较, 有统计学意义 (P0.05) , 但无生物学意义;8.0 g/kg·bw组孕鼠净增重与阴性对照组比较, 有统计学意义 (P0.05) , 但无生物学意义;其余各剂量组各指标与阴性对照组比较, 差异均无统计学意义 (P0.05) 。 各组均无吸收胎, 与阴性对照组比较差异均无统计学意义 (P0.05) ;阴性对照组有1个晚死胎, 死胎率为0.70%, 其余各组无死胎, 与阴性对照组比较差异均无统计学意义 (P0.05) 。 2.5.2 对胎鼠体重、腰椎、四下肢骨、鱼骨发育的影响 各剂量组及阿司匹林组胎鼠的身长与阴性对照组比较差异均无统计学意义 (P0.05) , 2.0 g/kg·bw组和阳性对照组胎鼠体重与阴性对照组比较, 差异有统计学意义 (P0.01) , 但无生物学意义, 其